氟非尼酮对uva诱导的光老化保护作用及其机制研究

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1、万方数据中图分类号＆盔!UDC垒f里硕士学位论文学校代码!Q5兰3密级垒珏氟非尼酮对UVA诱导的光老化保护作用及其机制研究StudyontheroleandmechanismoffluorofenidoneinUVAInducedPhotoaging作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导老师：龙娟临床医学皮肤病与性病学湘雅医院陈明亮教授论文答辩日期迎!生至：丝答辩委员会主席I!塑’中南大学二零一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：埠日期：醴年羔月盥学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编

3、本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：幽：导师签名万方数据氟非尼酮对UVA诱导的光老化保护作用及其机制研究摘要目的：探讨氟非尼酮(Fluorofenidone，AKF．PD)在UVA诱导的人皮肤成纤维细胞(Humanskinfibroblasts，HSF)衰老和小鼠皮肤光老化中的保护作用，及其可能分子机制。方法：1．培养原代人皮肤成纤维细胞，MTT比色法测定AKF．PD对UVA诱导HSF增殖抑制的影响。2．不同浓度的AKF．FD(0，50，100，1509M)处理UVA照射(10J／cm2水3d)后的HSF，最后一次照光结束后24hr，分别

4、用p．半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老相关p．半乳糖苷酶活性，免疫印迹法(western．blot)检测sirtl、磷酸化mTOR和衰老相关蛋白p16的表达，以及RT-PCR检测sirtl的转录水平。3．每次UVA照射后，用roTOR(mammaliantargetofrapamycin)抑制剂雷帕霉素(rapamycin，RP)(50nM)预处理HSFlhr后，再加AKF．PD孵育细胞。最后一次照光结束后24hr，分别通过qPCR检测sirtl转录水平和westernblot测定sirtl的翻译水平。4．动物实验：选取8周大小Fvb雌性小鼠，背部皮肤脱毛

5、后测得小鼠的最小红斑量(minimumerythermaldose，MED)。由1MED开始，每周照射3次，每隔两周增加一次UVA照射剂量，在照射剂量达15J／cm2后维持不变，共12周。对照组小鼠不做任何处理，实验II万方数据组和基质对照组小鼠局部皮肤每天擦拭2％AKF．PD凝胶或基质凝胶，照光时，在UVA照射后lhr擦药。12周后，观察小鼠背部皮肤改变，并取皮肤组织行HE染色，观察表皮厚度的变化。结果：1．AKF．PD可以逆转由UVA诱导的HSF增殖抑制，B．半乳糖苷酶染色率p<0．05)和P16表达的增加，并呈剂量依赖性。2．AKF．PD能抑制U

6、VA照射HSF导致的sirtl表达下降和mTOR磷酸化水平的升高，这种变化趋势也是呈剂量依赖性的p<0．05)。3．RP能加强AKF．PD上调UVA照射后HSF中sirtl水平的作用p<0．05)。4．UVA照射后小鼠背部皮肤有明显的皱纹形成，表皮厚度增加，2％AKF．PD凝胶能明显改善上述皮肤光老化的表型(萨O．05)。结论：1．AKF．PD可以通过抑制mTOR促进sirtl的增加，从而延缓人皮肤成纤维细胞的衰老。2．2％AKF．PD凝胶能显著改善小鼠光老化皮肤的表型。关键词：氟非尼酮；光老化；sirtl；雷帕霉素；小鼠分类号：R751III万方数据

7、StudyontheroleandmechanismoffluorofenidoneinUVAAbstractoBJECTIVEInducedPhotoagingTheaimofthisstudywastoinvestigatetheprotectioneffectofFluorofenidon(AKF-PD)onUVAinducedhumanskinfibroblasts(HSF)senescenceandmiceskinphotoaging，andpreliminarilydiscussedtheunderlyingmechanismofthisa

8、ction．METHODS1．WeuseMTTassaytoevaluatetheeffect