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《异亚丙基莽草酸抗炎作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、异亚丙基莽草酸抗炎作用机制研究作者：陈小军 顾立刚 石太平 孙建宁【摘要】：目的观察异亚丙基莽草酸(ISA)对人宫颈癌Hela细胞转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达作用的影响,探讨其抗炎作用机制。方法用MTT法体外检测ISA不同浓度对Hela细胞生长的抑制作用,采用双荧光素酶报告系统检测不同浓度药物对转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达活性的影响。结果ISA对人宫颈癌Hela细胞的生长没有明显的抑制作用；ISA处理组NF-κB-luc荧光素酶活性下降,而GAS-luc、STAT3-luc荧光素酶活性无明显改变。结论ISA可能通过下调转录因子NF-κB的活性,抑制炎症因子
2、的表达,对炎症反应起到抑制作用。【关键词】异亚丙基莽草酸 NF-κB 抗炎 Hela细胞 Abstract：ObjectiveTostudytheeffectof3,4-oxo-isopropylidene-shikimicacid(ISA)ontranscriptionfactorSTAT1,STAT3andNF-κBinhumancervixcancerHelacell.MethodsThecellproliferationwasassessedbyMTTassay.TheluciferaseactivityoftranscriptionfactorSTAT1,STAT3andNF-κ
3、BwasdeterminedbytheDual-LuciferaseReporterAssaySystem.ResultsISAcannotinhibitedthegrowthofHelacell.9TheluciferaseactivityoftranscriptionfactorNF-κBinHelacellstreatedwithISAwasinhibited,whiletheluciferaseactivitiesoftranscriptionfactorSTAT1andSTAT3werenotinhibited.ConclusionISAcaninhibitinflammation
4、,whichmayberelatedwithsuppressionofNF-κBtranscriptionalactivity. Keywords：3,4-oxo-isopropylidene-shikimicacid；NF-κB；anti-inflammation；Helacell 异亚丙基莽草酸(3,4-oxo-isopropylidene-shikimicacid,ISA)是木兰科植物八角茴香中提取的有效成分莽草酸的衍生物。ISA极性小且水溶性较好,结构稳定,很利于药学研究。目前试验证明,ISA有一定的抗炎作用,如对局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的抑制作用[1-2],但其内在机制尚
5、不清楚。 已知,转录因子STAT1、STAT3和NF-κB在炎症发生发展过程中起着重要的调控作用[3-4]。目前研究证实,在感染和炎症条件下,炎症性细胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α等可以通过STAT1、STAT3和NF-κB通路活化,诱导趋化因子、粘附分子等炎性介质的表达,介导炎症反应[5-6]。为此,本研究应用ISA处理人宫颈癌Hela细胞,体外观察对细胞转录因子STAT1、STAT3和NF-κ9B转录活性的影响,探讨ISA是否通过下调转录因子NF-κB的活性,抑制炎症因子的表达,对炎症反应起到抑制作用,为临床应用提供实验依据。 1材料与方法 1.1实验材料 ISA,纯度&
6、gt;98%,无色片状结晶,北京中医药大学药理教研室孙建宁教授提供。人宫颈癌Hela细胞株,国家人类基因组北方研究中心功能基因组Ш细胞库提供。胎牛血清、DMEM均为Hyclone产品。MTT、双荧光素酶试剂盒和报告基因GAS-luc、STAT3-luc、NF-κB-luc均为Promega产品。高效真核转染试剂盒为威格拉斯仪器有限公司产品。 1.2细胞培养 将人宫颈癌Hela细胞以含10%胎牛血清的DMEM在37℃、5%CO2孵箱中培养,取对数生长期的细胞进行实验。 1.3细胞增殖抑制实验 取对数生长期的Hela细胞接种于96孔培养板(细胞数为2×9104/孔,100μL/孔),加入不同
7、浓度的ISA[7],使其终浓度分别为0、0.1、1、10、100μmol/L,37℃、5%CO2孵箱中培养48h后每孔加入MTT溶液15μL,继续培养4h后每孔加入裂解终止液100μL,37℃、5%CO2孵箱中培养1h,酶联检测仪570nm波长处测定吸收度A值。 1.4质粒转染 人宫颈癌Hela细胞以1×104/孔接种于96孔培养板,24h后根据高效真核转染试剂盒说明书进行转染。将报告基因质粒GAS-luc
