桃果实果胶裂解酶基因pppls的克隆及表达分析

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1、万方数据CloningandExpressionAnalysisofPectateLyaseGenePpPLsofPeachFruit‘’、1’submittedt01nestsSbmlttetoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomy1一一YuanChenglong(DepartmentofHorticulture)Supervisor：DongXiaoying；DuanYanxinQingdao．Chma

2、June，2013万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：矿)弓关于论文使用授权的说明年历穆本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：／秀-、√巷刷醛孙兹吃轻时间：研年么月冶时间：>刃多年么月7彩日万方数据青岛农业大学硕士学位论文中文摘要摘要桃果实是典型呼吸跃变型果实，采后软化进程迅速，掌握桃果实成熟软化的分子机理，有望在较短时间内培育出品质更加优良的硬肉桃品种，这对提高果实综合品质、增强我国水果的市场竞争力具有重要意义。本研究以硬肉桃新品种‘双久红’果实为试材，以常规优良品种‘川中岛’为对照，研究了果实采后贮藏期间质地变化；同时，克隆了4个果胶裂解酶PpPLs基

4、因，利用实时定量Real-TimeRT-PCR技术分析了这些基因在果实成熟前后过程中及采后贮藏期间的动态表达，并研究了不同激素处理对这些基因表达的影响，主要研究结果如下：1．TPA质构分析桃果实贮藏期间质地变化应用TPA测试法，对硬肉桃‘双久红’及其母本‘川中岛’果实在贮藏期间的质地变化进行分析表明：硬肉桃‘双久红’果实的硬度，粘力，粘性，咀嚼性均显著高于“川中岛”的；而硬度形变量与对照的呈相反的变化趋势。相关性分析表明，果实粘力、粘性、咀嚼性与硬度都具有极显著的相关性，而硬度形变量与硬肉桃果实硬度呈极显著负相关，与软肉桃果实硬度呈极显著正相

5、关，说明这些指标可用于检测果实质地变化。乙烯利(50mg／L)、NAA(50mg／L)和ABA(50mg／L)均不同程度促进了两品种桃果实的软化，乙烯利和NAA处理促进了乙烯的释放，ABA处理抑制了‘双久红’桃果实中乙烯的释放。2．桃果实中PpPLs基因的克隆根据GenBank登录的桃PpPLs基因序列PpPLI(EF568780．1)和PpPL2(GU462127．1)，在两品种桃果实中成功克隆到PpPLl和PpPL2基因。又根据本课题组已构建的SSH文库进行差异筛选得到的1条桃果胶裂解酶的eDNA片段，通过电子克隆获得一条长度为1734b

6、p的片段，暂命名为PpPL3,其ORF为1692bp，编码563个氨基酸；根据已知序列(BU042038．1)克隆得到一条长度为1441bp的片段，暂命名PpPL4,其ORF为1128bp，编码375个氨基酸。3．桃果实中PpPLs基因的实时定量表达组织特异性表达分析表明，‘川中岛’中4个PpPL基因可能与雌雄蕊发育有关，在‘双久红’果实中，则可能与幼果的发育密切相关。成熟过程中，PpPLl和PpPL2表达水平较高，起到了重要作用，尤其是‘川中岛’中，PpPLl和PpPL2协同作用加快了果实成熟软化。‘双久红’桃果实的软化可能与PpPL3和P

7、pPL4的表达密切相关。贮藏过程中，训中岛’中PpPLl和PpPL2在前期发挥作用，之后主要由于印此了和PpPL4的表达，导致果实的软化和衰老。‘双久红’桃果实中4万方数据青岛农业大学硕士学位论文中文摘要个基因在贮藏期间均发挥了重要作用。关键词：桃果实；成熟；果胶裂解酶；基因克隆；表达分析万方数据AbstractPeaCh(PrunusPersicaL．)fruitisakindofclimactericfruit，thepostharvestsofteningprocessquickly．Masteringthemolecularmecha

8、nismoffruitripeningandsofteningofpeach，maybecontributedtobreedamoreexcellentqualit