桃果实ppcuznsod、ppexp和pppip1基因的克隆与表达分析

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1、万方数据MolecularCloning1H’r’andExpresslon0tPpCuZnSOD,PpEXPandPpPIP1GenesofPrunuspersicaFruitThesissubmittedtongdaoAgrkulturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWuJunshuai(DepartmentofAgronomy)Supervisor：LiPeihuanDuanYanxinQingdao．ChmaJune，2013万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人

2、在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书面使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。一躲猫c忡时间：矽侈年厶侈日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位

3、论文在解密后应遵守此协议)研究嵫：貉冲rlJ研究生签名：翮f铷繇麓磊补时同：砂I)年6窍f宇日时间：秒侈

4、年么月侈日万方数据青岛农业大学硕士学位论文中文摘要摘要jt,Jor究以硬肉桃新品种‘双久红’为试材，以常规品种‘川中岛白桃’为对照，通过对不同时期及不同外源激素处理的果实硬度及乙烯释放量的研究和桃果实PpCuZnSOD．eprⅨP和助P伊』基因的克隆与表达分析，旨在探清硬肉桃果实成熟后变软慢的分子机制，为桃新品种的选育和推广，全面提高桃树栽培的经济效益提供理论依据。试验研究结果如下：乙烯弄'J(50mg／L)、NAA(50mg&)和ABA(50mg／L)3种外源激素处理能促进‘双久红

5、’果实的软化，而在‘川中岛白桃’果实中只有乙烯利和NAA作用较明显；乙烯利和ABA处理促进了‘川中岛白桃’乙烯释放高峰提前到来，NAA处理则使峰值增大，在‘双久红’中乙烯利和NAA提高了乙烯的释放量，而ABA却完全抑制了乙烯的释放。本试验获得了全长665bp，编码152个氨基酸的桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因PpCuZnSOD全长cDNA序列(GenBank登录号：JX217743)，在此基础上，成功构建了该基因的原核表达载体pET-32a(+)．PpCuZnSOD，并在大肠杆菌中得到高效表达，层析纯化后获得活性为5．23×103U／nag，pr0的CuZnSOD酶。荧光定量RT．PCR结

6、果表明：成熟前后20d过程中PpCuZnSOD基因在成熟后表达量高于成熟前，且在‘双久红’中的表达丰度显著高于‘JIl中岛白桃’的，该基因组织特异性不显著；在‘J

7、l中岛白桃’中，NAA处理在前期有基因表达高峰，乙烯利处理的高峰出现在后期且高于NAA处理的，ABA则明显抑制了该基因的表达，在‘双久红’中，对基因表达影响最大的乙烯利处理，其次为NAA处理，ABA处理无显著影响。获得了全长1142bp，编码252个氨基酸的桃果实扩展蛋白基因ep戤7,的全长cDNA序列，在此基础上，成功构建了该基因的原核表达载体pET-32a(+)．epEXe，并在大肠杆菌中得到表达。荧光定量RT—PCR结果

8、表明：成熟期前后PpF_．XP基因出现两个表达高峰，并且在幼果中的表达量高于其他组织器官；在‘川中岛白桃’中，该基因表达逐渐下降，乙烯利处理能够促进基因表达，在‘双久红’中，乙烯利和NAA能够明显促进基因表达，ABA对该基因的表达无显著影响。获得了全长1163bp，编码290个氨基酸的桃果实水通道蛋白基因聊J全长cDNA序列(GenBank登录号：JX317646)，在此基础上，成功构建了该基因的原核表达载体pET-32a(+)一印P口J。荧光定量RT．PCR结果表明：成熟前后20d过程中印P俨．，基因在‘川中岛白桃’中的表达量高于‘双久红’的；乙烯利促进该基因的表达，NAA在‘川中岛白

9、桃’中主要表现为抑制基因表达，ABA在‘双久红呻抑制基因表达。关键词：桃果实；PpCuZnSOD；PpEXP；忍忧PJj基因；克隆；表达万方数据青岛农业大学硕士学位论文英文摘要AbstractThefruitsofpeach‘KawanakajimaHakuto’and‘Shuangiiuhong’wereusedtostudyfruitfirmnessandethylenereleasequantityofdifferenttim