（果树学专业论文）桃果实几个乙烯信号转导相关基因的克隆及其表达

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1、山东农业大学硕士学位论文中文摘要乙烯是调控植物生长发育重要的气态植物激素，其生理作用最终是通过其信号转导途径实现的。肥城桃(Prunuspersica‘Feicheng’)为一地方特色名产，是典型的呼吸跃变型果实，对乙烯作用极为敏感。本实验从肥城桃果实中成功克隆了与乙烯信号转导有关的4个全长基因，并在转录水平上研究了PpEILs和PpEBFl的表达特性，主要结果如下：1．根据植物乙烯转录因子EIL(EIN3．1ike)家族的氨基酸和核苷酸保守区序列，设计简并引物，采用RT-PCR从成熟桃果实中分离了两个571bp的EIL同源基因片段。随后运用RACE技术，分别扩增得到了两个包含完整开放阅读框(

2、ORF)及非编码区序列(UTR)的乙烯转录因子的cDNA，即PpEILl和PpEIL2。它们分别为2086bp和2557bp，编码蛋白大小均为601个氨基酸。虽然PpEILl和PpEIL2在氨基酸水平上的同源性仅为42％，但在N末端DNA结合功能域可高达86％。聚类分析结果表明，两者分别属于EIN3／EIL家族两类不同乙烯转录因子成员。2．在GenBank中获得的EST序列基础上，分别通过5’RACE和3’RACE技术结合得到全长为3057bp的PpEBFl，包含l941bp的ORF、248bp的5’UTR和868bp的3’UTR，编码蛋白的分子量为68．96kD，推测等电点为7．41。根据E

3、ST库中的核苷酸序列，设计特异引物进行PCR扩增，结果得到了l263bp的PpERFl全长基因，包含一个708bp的ORF。序列分析表明，PpERFl与番茄、拟南芥、苹果和葡萄等在DNA结合功能域的约58个氨基酸中，同源性可达68．4％一loo％，且在该区域中存在1个0【．螺旋和3个反平行链构成的B．折叠结构。该序列与拟南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性为58．8躺7．5％，属于同一类ERF家族成员。3．实时荧光定量PCR表明，在花器官及花后40天的幼果中，PpEILs和epESFl表达量较高，随着果实的成熟，表达量有增高的趋势；20"C时。1ul／L外源乙烯明显促进PpEILs和PpEBF

4、l的表达，且随时间延长表达量增加：而1pl／L1一MCP处理则抑制PpEILs和PpEBFl的表达。关键词：桃；乙烯信号转导；基因克隆；表达桃果实几个乙烯信号转导相关基因的克隆及其表达J⋯1■一-loCloninl兽andexpressionoIseveralgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitAbstractEthyleneisagaseousplanthormonethatplaysakeyroleinmanyprocesses．Toexploretherolesofethyleneinplantfuncti

5、ons，itisimportanttoknowthemoleculardissectionofsignaltransduction．Peach(erunuspersica‘Feicheng’)isaspeciallocalproductandtypicallyclimactericfmit，whichissensitivelyaffectedbyethylene．Inthisexperiment,fourgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitwerecloned．Steady-statetranscriptleve

6、lsofPpEILsandPpEBFlwereassessedbyquantitativereal．timePCR．Themainresultsareasfollows：1．TwoeDNAfragments，namedasPpEIL1andPpEIL2，wereisolatedfrommaturepeachfruitbyRT-PCRusingdegenerateprimerscorrespondingtotheEIN3／EILconservedregionsequence，Both5’and3’endsequencesofthetwocDNAswereclonedusingRACEtechni

7、que．PpEIL1andPpEIL2were2086and2557bpinlength，respectively,whilethepredictedopenreadingflames(ore：)oftheircDNAswerebothI803bp．ThesimilaritybetweenPpEIL1andPpEIL2Wasonly42％ataminoacid1evel，but86％between