（果树学专业论文）梨果实acc氧化酶基因克隆的研究

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1、摘要梨(Pear)属蔷薇科(Rosaceae)梨亚科(Pomaceae)梨属(PyrusL．)植物，是我国重要的经济树种之一，在我国有着悠久的栽培历史。为解决困扰梨生产已久的果实储藏、保鲜问题，本研究以乙烯是影响梨果实采后衰老、腐烂的主要因素为依据，从影响梨果实内源乙烯合成的ACC氧化酶入手，对ACC氧化酶的基因进行序列分析，以期为日后从遗传基因上改变梨果实采后特性奠定基础，取得了以下成果：1．建立了适合于梨果实总RNA提取的改良CTAB法。在比较热硼酸法、异硫氰酸胍法、CTAB—LiCl法和改良CTAB法提取总RNA效果的基础上，针对梨果肉组织中富含多酚、多糖的特

2、点，在传统CTAB法的基础上增加了去除多酚和多糖的步骤，取得了良好的试验结果，获得了高质量的梨果实总RNA。2．获得三个梨品种ACC氧化酶基因eDNA片断。以雪花梨、黄金梨、茄梨等3种果实为试材。提取并纯化果实总RNA；经反转录合成cDNA；根据ACC氧化酶的氨基酸保守序列翻译成的密码子核苷酸序列，设计合成一对特异引物；经PCR扩增、克隆分别得到三种梨果实的三条基因片断。3．对获得的基因片断进行亚克隆，经测序获得三个梨品种的ACC氧化酶基因序列；通序列比较得知研究获得的三个基因片断与已知其它梨品种ACC氧化酶基因的同源性均在9896以上，证实本研究得到的基因片断为A

3、CC氧化酶基因的一部分。关键词：梨；RNA；ACC氧化酶基因；cDNA；克隆TheStudyontheACCoxidasegenesCloneofPearfruitAuthor：DongZhenMajor：Pomologs"Supervisor．ZlumgYu-xingShenLian-yingAbstractgenusPyr吣，amemberofPomoideaeofRosaceae，isonekindofimportanteconomicfruittreeinChina,whichhasalongtimehistorytobecultivated．Thereis

4、adifficultyprobleminpearmanufacture，whichishowtostovethefruitfor’muchlonger．Ithadbeenprovedthattheethyleneplayamajormaturativeroleinfruitripeningbymo陀andmoreinvestigations．BasedonthestudiesofACCoxidasewhichisthekeyerlzymeinethylenebiosynthesizing,thisresearchistoclonetheACCoxidasegenes

5、ofpearfruitsandanalyzethegenestructures．nisworkwilldogreathelptomadeasolidfoundationforwhichtheresearchofbuildinganti·senseexpressionV朗巾orofACCoxidasegenesingenusPyn塔．Mainresultsofthisresearcha糟asfoliows：1．It’dbeenbuiltamethod,whichwassuittotheextractionofthetotalRNAofWhangkeumhae(肋rus

6、pyr的妇Nakai．)，Xuehua(砂rusbretschneideriRehd．)andClapp’SFavorite(毋ruscommunisLinn．)，thatWasimprovedC1=柚method．OnthebasisofmakillgcomparisonastotheeffectofextractingtotalRNAbyfourmethods，thatwere1．Hotboratemethod,2．Guanidineisooisothiocyanatemethod,3．C1：AB．LiClmethod,4．ImprovedCTABmetlled

7、,duetohiglllevelsofpolyphenoicontentandpolysaccharidesingenusPyrusfruittissues，thespecialstageofgettingridofpolyphenolcontentandpolysaccharidesWasaddedSOastoimprovetheconventionalCTABmethodinisolatingRNA．neresultsshowedthattheimprovedCTABmethodWasbetterthanothers．2．ObtainedthecDNAfra