（果树学专业论文）若干核果类果树及番木瓜β半乳糖苷酶同源基因的克隆

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是在指导教师的指导下，通过我的努力取得的成果。并且是自己撰写的．尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包古其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名：王跷b日期：矿-j．，．，；论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公

2、布论文的全部或部分内容．可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。口不保密，本论文属于不保密。曰学位(毕业)论文作者亲笔签名：工易

3、譬指导教》币亲笔签名：劾镢豇1日期：≯··，·‘．≥日期；Ⅺd．6．b福建农林大学硕士学位论文摘要声·半乳糖苷酶是果实成熟过程中唯一作用于卢．(1，4)．半乳糖苷键而使细胞壁产生半乳糖残余物的酶，与果实软化密切有关。本研究以台湾甜桃、美国黑李、龙眼梅、油捺、漳红番木瓜等果树的叶片(或果肉)为材料，改良了基因组DNA和总RNA的提取方法，采用同源克隆技术，分离出编

4、码，．半乳糖苷酶的基因片断或cDNA片断，为采用反义RNA技术减缓果实软化进程奠定基础，主要研究结果如下：1．改良了桃、李、梅、榇、番木瓜基因组DNA和总RNA的提取方法。对传统CrAB法提取基因组DNA以及TRiZoL提取总RNA的方法进行改良，得到纯净、完接的基因组DNA和总RNA样品。2．根据苹果口．半乳糖苷酶cDNA序歹0，设计一对特异引物，直接进行PCR扩增，克隆了台湾甜桃、美国黑李、龙眼梅、油檬等核果类果树鼻-半乳糖苷酶基因片断，测序结果表明，这些片断的大小分别为1388bp、1388bp、1389bp，它们之

5、间具有很高的同源性，达98．90％。用同一对特异引物，通过RT-PCR，也克隆了桃的幼果口．半乳糖菅酶cDNA片断，测序结果表明，该片断的长度为862bv，编码286个氨基酸，序列分析结果表明，这个片断与蔷薇科果树中的苹果、日本梨、欧洲梨的卢-半乳糖苷酶基因具有较高的同源性，平均为87％。3．根据苹果和梨芦．半乳糖苷酶cDNA序列，设计另一对特异引物，通过RT-PCR扩增，克隆了漳红番木瓜叶片和果实编码肛．半乳糖苷酶cDNA片断，测序结果表明，这两个片断长度均为791bp，编码263个氨基酸，它们之间具有同源性很高，达99

6、．12％，仅出现7个碱基的差异，与欧洲梨、苹果、日本梨、丰香草莓、丰亡果、甜橙等果树自淞．半乳糖苷酶cDNA的同源性也很高，平均为80％-88％。关键词：桃(PrunuspersJca(L．)Batsch)；李(PrunussaJicJnaLindl，)；梅(PrunusnllmleSieb．etZucc．)；捺(PrunussalicinaLindl．var．cordataJ．Y．Zhanget8D；番木瓜(CaricapapayaL¨)：夕，半乳糖苷酶：同源克隆塑罂查整查兰塑r上堂丝堕壅茎苎垫茎Cloningoffl-

7、GalactosidaseinSomeStoneFruit-treesandPapayaAbstract鼻-galactosidaseistheonlyenzymethathasbeenshowntocleavethep-(1—+4)-galactanbonddirectlyandproducegalactosylresiduesfromthecellwallduringfruitripening,whichrelatestothesofteningofmanyfruits．Inthepresentstudy，basedo

8、ntheoptimizationofthegenomicDNAandtotalRNAextractionmethods，thewriterhasclonedthecDNAorgenomicDNAfragmentsofp-galaetosidasegenefromtheleavesorfruitsofTaiWallsweetpeach，plnm，mume，naiandpapaya(zhanghong)inFujian．Themainresultswereasfollowing：1．Themethodsforextractin

9、ggenomicDNAandtotalRNAfromtheleavesandpulpsofpeach，plum，mume，naiandpapayaweremodified．ThepureandintactsamplesofgenomicDNAandtotalRNAwereobtainedbymodify