（果树学专业论文）badh基因转化国槐及黄金槐的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文中文摘要山东省有大量的滨海和内陆盐碱地，培育和选择抗盐碱植物种质是我省林木育种的重要目标。国槐(SophorajaponicaL)、黄金槐(Sophorajaponicavs．rgolden)是蝶形花科落叶乔木，是优良的多用途树种，具有重要的生态和经济利用价值。本研究以国槐转rd29A基因植株为材料，进行了相关耐盐生理生化指标的测定研究，为耐盐新种质试验推广提供了理论基础，并进一步导入别删(山菠菜甜菜碱醛脱氢酶)基因，获得了转rd29A和BA姗个基因的国槐株系；同时，以黄金槐组培苗为材料，转入BAD旌因，获得了耐盐新种质。具体结果如下：，1．以转rd2

2、9A基因国槐株系及其受体亲本试管苗为材料，在NaCl胁迫下，分别在处理后不同时间测定了耐盐生理指标。结果表明：在0．6％NaCl胁迫下，国槐植株内可溶性糖含量、脯氨酸含量，丙二醛含量以及相对电导率都随NaCl胁迫时间的延长而增加；与受体亲本植株相比，转基因株系的叶绿素含量、细胞渗透调节物质含量和细胞膜稳定性提高。说明转rd29A基因的国槐植株耐盐性得到提高。2．运用农杆菌介导法以转rd29A基因国槐为材料继续转入BA腿因并对其转化方法进行了优化。研究结果表明：适宜的农杆菌浓度OD600值为0．3．0．5，侵染时间为15．20illinl平板培养法活化农杆菌、延迟两周筛选、用2

3、00gMAS溶液浸泡伤口可以提高转化率；转化前的低温预培养及转化时抽真空的方式不能提高转化效率。经过以上条件的优化获得了PCR检测呈阳性的植株，阳性检测率为16．7％，表明外源目的基因己整合到国槐基因组中。3．以黄金槐大叶片作为外植体，筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基为：MS+6-BA4mg／L+IBA0．5mg无，确定了黄金槐遗传转化中适宜的抑菌浓度为Cef400mg／L，同时也确定了抗生素的l晦界浓度及适宜的添加时间，试验选用Kan浓度为100mg／L作为筛选转化体的适宜浓度，侵染10．15d后添anion可获得较多的抗性芽；并利用根癌农杆菌介导法将BADH基因转化国槐及

4、黄金槐的研究BAD旺基因导入黄金槐，PCR阳性检测率为19．4％，表明BA瞄因已成功导入黄金槐。关键词：国槐：黄金槐；BADH基因；遗传转化；抗盐性测定2山东农业大学硕士学位论文AbstractThereisalargeofcoastalandinlandsaline，SOcultivatingandalkaliresistantgermplasmselectionbreedingintheforestisanimportantgoal．SophorajaponicaandSophorajaponicaVargoldenareoflegumesophoraldeciduous

5、trees，belongstotemperatetreespecies，whichisanexcellentmulti-purposespeciesandholdsecologicalandeconomicvalue．InthisstudyinordertOprovidetheoreticalfoundationfornewgermplasmfurthertests，somephysiologicalandbiologicalchangesofthemundersaltstressesweretested，meanwhilemadeusingoftheAgrobacteriu

6、m-mediatedtransformationofBADHgeneinSophorajaponicatoenhanceitsanti-reversibility，atthesametime，BADHgeneweretransformedintoSophorajaponicavatgoldentoacquirethenewspecieswiththeanti—salt．皿eresultsaleasfollowing：1．ThestudyculturedtheseedlingsoftransgenicSophorajaponicawithrd29Ageneanditsrd29A

7、-一recirIientparentsinthespecializednutrientsolutions诵tllNaClcontents，andthensomephysiologicalandbiologicalchangesofthemweretestedseparatelyafterdifferentdays．Theresultshowedthatthecontentofsolublesugar，freeproline，malonaldehydeandelectricconductivitywere