花椰菜ACC氧化酶基因的克隆及其RNAi对内源基因表达的抑制作用

《花椰菜ACC氧化酶基因的克隆及其RNAi对内源基因表达的抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据遗传学报ActaGeneticaSinica，July2005，32(7)：764—769SSN0379—4172CloningofACCOxidaseGeneandInhibitionofEndogenousGeneExl：ithRNAi。nCauliflowereneExpressionwithRNAinICHENYin—Hual，ZHANGJun-Hon91，OUYANGB01’2，LIHan-Xia2，YEZhi．Bia01，2’①(1．NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImprovement，Wuhan430070，China；2．Dep

2、artmentofHorticultureandForestry，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China)Abstract：Afragmentof1202bpofthecandidateAC0genewasamplifiedfrOmthecauliflowerfbrassicaoler-aceaVar．botrytis)genomeusingthedegeneratedprimerswhichweredesignedaccordingtotheconsensusse—quenceofACOaminoacidsamongvarious

3、plantspecies．TheresultofBLASTshowedthesequencepresentedaveryhighmatchwiththeACOgenesfromotherplants：thehomologuewasfrOm83％to99％．Threeexonsandtwointronswereidentifiedinthissequence．ThesplicedlengthofmRNAwas756ntandencoded252ami．noacids．TheputativenewgenewasdenominatedBoACO，andsubmittedtoGenBank(AY6

4、76466)．Usingthesequence，weconstructedanRNAinterference(RNAi)transformationvectorthroughthewayofBPcloning．Thetransformationintocauliflowerwasperformed．Fiveregeneratedplantswithkanamycinresistancewereob—tained．AndthetransgeneintegratedintocauliflowergenomewasprovedwithPCRandSouthernblotting．Theexpre

5、ssionofthisACOgeneisdown—regulatedbasedontheNorthernblottinginthetransgenicplants．Theac-tivityofACOenzymewasdepressedsignificantly．Keywords：cauliflower；ACCoxidasegene；RNAi；transformation花椰菜ACC氧化酶基因的克隆及其RNAi对内源基因表达的抑制作用陈银华1，张俊红1，欧阳波1’_，李汉霞2，叶志彪1’2’①(1．华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉430070；2．华中农业大学园艺林学学院，武汉4

6、30070)摘要：根据亲缘关系较近的几种作物ACC氧化酶氨基酸序列，设计一对简并引物，从花椰菜(Brassicao／era—ceavar．botrytis)基因组中获得长1202bp的候选片段。序列分析表明该基因含有3个外显子(Exon)、2个内含子(Intron)，编码区序列长756bp，编码252个氨基酸。同源性分析发现其与青花菜(Brassicaoleraceavar．Itali—ca)上已发表mRNA序列同源率为99％(GenBank序列号：X81629)，推断该基因为花椰菜ACC氧化酶基因，命名为BoAC0(GenBank登录号：AY676466)。在此基础上，用BP克隆的方法构

7、建BoACO的RNA干涉(RNAi)载体pHBACO，对花椰菜进行遗传转化，获得卡那霉素抗性转化植株5棵，分子检测证实外源片段成功导入其中3棵花椰菜基因组中。Northern杂交分析显示：转基因植株内源ACO基因转录的mRNA被降解。ACC氧化酶活性分析进一步表明，外源基因的导人大大地降低了ACC氧化酶活性。收稿日期：2004～05—14；修回日期：2004—09—13基金项目：国家自然科学基金(编号：30270914)