新的候选肝癌标志物胸腺肽β4的初步验证及其影响肝癌细胞生物学行为的研究

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1、第二军医大学硕士学位论文新的候选肝癌标志物胸腺肽p4的初步验证及其影响肝癌细胞生物学行为的研究PreliminaryVerificationofThymosinB4asaNewCandidateMarkerofHepatocelIularCarcinomaandStudiesonitsInfluenceontheBiologicalBehaviorofHepatocellularCarcinomaCells硕士生导师学科、专业培养单位堵乔早1I答辩日期张孝峰殷正丰教授肿瘤学东方肝胆外科医院2013年5月2013年5月独创性

2、声明0IIIIIIIIIIIfY2339779本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：瑶啐1日期：弼年j月声日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将

3、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文(保密的学位论文在解密后适用本授权书)。脯名：晚q日期：叫，；年，月户日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1．Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4．缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10．第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、．12．肝癌血清异常表达的小分子多肽的筛选和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12．一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12．(一)实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12．1、MB．IMAC．Cu磁珠⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12．2、主要化学药品和生物试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．12．3、主要溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．12．4、主要实验仪器和设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12．(二)实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯．13．’1、临床病例选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．13．2、血清样本采集、运送和保存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13．3、MB．IMAC．Cu磁珠处理血清样本⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．14．4、样品的点样和质谱检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．15．5、数据处理和分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．二、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17．(一)各组血清标本小分子量蛋白质指纹图谱的收集和整理．17．(二)各组血清标本中差异蛋白峰的寻找⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯．．17．(三)肝癌血清中显著差异蛋白TIM的发现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一17一三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18一(一)液体芯片飞行时间质谱技术与肝癌诊断的关系⋯⋯⋯⋯⋯．18．(二)Tp4临床应用潜能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-19一第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．一21-胸腺肽p4作为一个候选肝癌标志物的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一2l一一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-21一(一)实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯．．21—1、细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．2、主要化学药品和生物试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2卜3、主要试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22—4、主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22．(二)实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-23—1、细胞培养及传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23．2、Real-timePCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一24—3、流式细胞术检测胞内抗原的间接免疫荧光标记法⋯⋯⋯

8、．26．4、ELISA检测血清标本中邵4的表达量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一26—5、免疫荧光激光共聚焦试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．27—6、免疫组织化学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28．7、统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28．二、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯