ctgf对肝癌细胞生物学行为的影响及其与pparγ之

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1、CTGF对肝癌细胞生物学行为的影响及其与PPARγ之【】目的探讨结缔组织生长因子（ctgf/c2）对肝癌细胞生物学行为的调控作用，及其与pparγ在肝癌中的相互关系。方法免疫组织化学法检测hepg2细胞中ctgf及pparγ蛋白的表达。经不同浓度、不同时间的ctgf抗体封闭处理人肝癌细胞hepg2后,mtt法测定细胞活力,博依登小室测定细胞侵袭及迁移特性的改变。经pparγ激动剂(rosiglitazone,罗格列酮)处理hepg2细胞后，rtpcr检测ctgfmrna表达的改变。结果hepg2细胞表达ctgf及pparγ蛋白。肝癌细

2、胞经ctgf抗体处理后，其增殖受抑制,且呈时间和剂量依赖性,同时细胞的侵袭、迁移能力也受到抑制。hepg2细胞经罗格列酮处理后，其ctgfmrna的表达下降。结论ctgf可以调控肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。pparγ调控肝癌细胞的生长，部分是通过改变ctgf的表达来实现的。【关键词】ctgf;pparγ;侵袭;迁移;人肝癌细胞influenceofctgfonhepatocellularcarcinomacellsandcorrelationininstituteofpathology,lanzhouuniversity,lanzhou7300

3、00,chinacorrespondingauthor:limin,email:limin0606163.abstract：objectivetoinvestigatetheeffectofconnectivetissuegroanhepatocellularcarcinomacells,andexplorethecorrelationbetethodstheexpressionofctgfandpparγproteininhepg2cellmunohistochemistry.hepg2cellstreatedtt.thechangeofinv

4、asionandimmigrationofhepg2cellsrnalevelofctgfinhepg2cellstreatedttassaydemonstratedthatantibodyofctgfhadinhibitoryeffectontheproliferationofhepg2cellsinatimeanddosedependentmanner.theinvasionandimmigrationofhepg2cellsonstratedthatthemrnalevelofctgfmigrationofhepg2cells.them

5、echanismofpparγregulatingthegroaybeassociatedmigration;hepatocellularcarcinomacells结缔组织生长因子(connectivetissuegroeproliferatorsactivatedreceptors,pparγ)是一类核转录因子[2],同样具有调控肿瘤细胞分化,抑制增殖的作用。本实验观察了ctgf对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响，以及与pparγ两者之间的相互关系。1材料与方法1.1细胞及主要试剂人肝癌细胞株hepg2由兰州大学病理学研究所提供。四甲基唑蓝

6、（美国sigma公司）。兔抗人多克隆ctgf抗体及pparγ抗体（武汉博士德生物工程有限公司）。鼠抗人单克隆ctgf抗体（美国santacruz公司）。sp免疫组化染色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。鼠尾胶（本实验室自制）。pparγ激动剂罗格列酮（rgz）（浙江万马公司），完全溶于二甲基亚砜，dmso终浓度不超过0.1%。博依登小室（美国millipore公司）。1.2试验方法1.2.1免疫组织化学法检测hepg2细胞中ctgf及pparγ蛋白的表达取对数生长期的hepg2细胞，制成单细胞悬液后爬片。免疫组织化学染色按试剂盒说明操作

7、。制片后光镜下观察细胞，细胞浆或细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性染色。1.2.2ctgf对人肝癌细胞hepg2增殖能力的影响取对数生长期的hepg2细胞制成单细胞悬液,调整细胞密度为3×104／ml,悬浮于含10%fbs的rpmi1640培养液中，接种于96孔板,每孔200μl。待细胞贴壁后,吸去原培养基,加入含浓度分别为5、10、20、50μg/mlctgf抗体的新鲜rpmi1640培养液（含10%fbs）,每个浓度设4个复孔,同时设立对照组(无fbs的rpmi1640组作为mtt值的调零组，仅加入细胞未经抗体封闭组作为抑制率计算时的对照组a值)。在分

8、别培养24、48、72h后,每孔加入mtt（5μg/ml）液20μl,继续孵育4