下调膜联蛋白A2基因转录对肝癌细胞生物学行为的影响-论文.pdf

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1、620·中华肝脏病杂志2014年8Y]第22卷第8期ChinJHepatol，August2014，Vo1．22，No．8·肝癌·下调膜联蛋白A2基因转录对肝癌细胞生物学行为的影响张海健姚敏钹琦时运李景源陈心王司晔-姚登福【摘要】目的观察下调膜联蛋白A2(annxJ_t-iA2，ANXA2)表达对肝癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法以定量PCR分析不同肝癌细胞ANXA2mRNA转录水平，以Westernblot分析ANXA2表达；以免疫荧光检测ANXA2在细胞内表达和分布；以碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期；以CCK-8试剂盒分析细胞增殖潜能；以transwell

2、实验分析其侵袭潜能；以创伤愈合试验分析其迁移潜能；以裸鼠移植瘤模型分析其致瘤潜能。两样本均数比较用检验，率的比较用检验，等级资料比较用秩和检验，多样本均数的两两比较采用口检验，组间差异用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC97一H细胞ANXA2表达明显高于HepG2、SMMC一7721和SMMC一7402和L02细胞；特异性shRNA沉默ANXA2效率在80％以上；免疫荧光显示ANXA2定位于细胞膜和细胞质，胞核少见；下调ANXA2表达明显下调HCC细胞s期比例(口=8．001，P=0．002)，抑制细胞增殖(q=17．140，P<0．01)、迁移潜能(=12．808，

3、P<0．O1)和侵袭潜能(q=9．069，P=0．002)；裸鼠移植瘤模型显示干扰组瘤重下降(g=11．968，P<0．01)，瘤体中ANXA2表达下调：2．530，P=0．011)。结论下调ANXA2基因转录显著影响肝癌细胞的生物学行为，可望成为肝癌分子治疗的潜在靶目标。【关键词】癌，肝细胞；膜联蛋白A2；RNA，小发夹；生物学行为EfectsofAnnexinA2genetranscriptiondown-regulationonhumanhepatomacellbiologicalbehaviourZhangHao'ian,YaoMin,QianShiYun,LiJ

4、ingyuan，ChenXin,肋Siye,YaoDengfu．ResearchCenterofClinicalMedicine,AfiliatedHospitalofNantongUniversity,NantongJiangsuProvince226001，ChinaCorrespondingauthor．"YaoDengfu,Email：yaodf@ahnmc．com[Abstract]ObjeetiveToinvestigatetheefectsofAnnexinA2(ANXA2)deficiencyonthemalignantbiologicalbehaviou

5、rofhepatomacells．MethodsThehumanhepatocellularcarcinoma(HCC)cellslinesMHCC97一H，HepG2，SMMC．7721，SMMC7402andL02wereevaluated．TheexpressionanddistributionofANXA2wereanalysedbywestemblotting，real-timePCR,andimrnunohistochemislry．Cellcyclewasassessedbyflowcytometryandpropidiumiodidestaining．Ef

6、ectsofANXA2silencingoninvasionandmigrationpotentialwereassessedbytranswellassayandwoundhealingassay,respectively．ProliferativepotentialWasassessedbyCCK-8kitinvitroandxenografttumour-growthassayinvivo．Thet-test,chisquaretest，ranksun1test，q-testandF-testwereusedforstatisticalanalyses．Result

7、sTheexpressionlevelofANXA2WasmarkedlyhigherintheMHCC97一HcellswithhighmetastasispotentialthanintheHepG2，SMMC一7721，SMMC一7402andL02cells．TheeficiencyofshRNA—mediatedANXA2deficiencyWaSmorethan80％analysisoftheMHCC97-HcellsindicatedthatANXA2expressionWasmainlylocalizedtot