下调ccno基因表达对宫颈癌hela细胞生物学行为的影响

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1、也案京碱皆聲化临床医学专业学生毕业论文讀．？？？（八年制）：！！北京獅齡１＾教务诗！—测巧学校代码：１００２３；２００７０学号１０５３下调ＣＣＮ０基因表达巧宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生物学行为的影响专业年级：北京协和医学院临床医学专业２００７级姓名：王馨巧导师；向阳（教授）北京协和医学院临床学院（北京协和医院）妇产科完成日期：２０１５年６月目录ＩｍｍＡｂｓｔｒａｃｔ３引Ｂ５一、实验材料和仪器设Ｓ７二、实验方法１０＝１７、实验结Ｓ０、職２１Ｓ、结ｉｆｅ２７

2、４综述３英文缩略词表４８致谢４９输要一，背景；宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之居女性癌症患者死亡原因的第４位。近年来发病率逐渐增高，尤其是发展中国家。除ＨＰＶ感染外，宿主与细胞生长分化相关的基因表达异常在宫颈癌的发病机制中同样具有重要作用，。近年来临床前基础研究表明宫颈癌基因治疗是很有潜力的治疗手段，其中包括在细胞周期控制和调亡信号中具有重要作用的ｐ５３基因治疗、宫颈癌基因治疗中研究较多的Ｂａｘ基因治疗、ＨＰＶＥ２和２１基因Ｗ及针对癌基因的反文ＲＮＡ技术治疗和宫颈癌治疗的理ｐ－Ｓ想候选基因ＦＨＩＴ和ＰＴＥＮ基因的研究。我们课题组前

3、期研究利用ＲＮＡ巧技术，发现细胞周期蛋白家族中的ｃｙｃｌｉｎＯ在宫颈癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，提示其编码基因ＣＣＮＯ可能与宫颈癌的发生发展相关。目的；研巧下调ＣＣＮＯ基因表达对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株体外增殖、细胞周期及调亡的影响，为研究宫颈癌生物治疗提供理论依据。柯料：病理组织切片来源于北京协和医学院妇产科宫颈痛患者，包括癌灶组织及癌旁组织样本，剔除术前接受放射治疗、化学治疗及未能获取满意存档石蜡组织标本者；Ｈｅｌａ细胞株，为人类宫颈腺癌细胞株，购自上海细胞库（ＴＣＨＵ１８７，中国上海）细胞典藏委员会。方法１．应用免疫巧光检测

4、ＣＣＮＯ在宫颈癌组织中的表达情况；２－．设计禪向ＣＣＮＯ小干扰ＲＮＡ（ＣＣＮＯｓｉＲＮＡ），将其转染入体外培养的宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株细胞中，沉默细胞内源性ＣＣＮＯ基因表达；３－．应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ方法检测ＣＣＮＯｓｉＲＮＡ的转染效率，确定ＣＣＮＯ基因被沉默，可用于后续实验；４ＣＣＫ－８ＣＣＮＯ对．应用方法检测宫颈癌细胞增殖的影响；５ＣＮＯ．应用流式细胞分析技术检测Ｃ对细胞周期转他、细胞调亡的影响。结果１ＣＣＮＯ基因表达高于癌旁组织；．免疫巧光检测宫颈癌中２－．转染ＣＣＮＯｓｉＲＮＡ可特异高效地下调宫颈癌Ｈｅｌａ细胞ＣＣＮＯ蛋白

5、表达水平；１３、－ＮＯ－ｓＲＮＡ转染实验．在转染７２ｈ９６ｈ后，ＣＣＫ８法适示ＣＣｉ組生长速率明湿低于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；４－．细胞周期检测显示ｅａｓＲＮＡ实验组Ｇ，Ｈｌ细胞转染ＣＣＮＯｉ１期细胞较对照沮増多均７％左右（Ｐ＜０．０５）Ｓ期细胞比例则减少１２％左右（Ｐ＜０．０５），而；亡检测显示Ｈｅ－５ｌａ细胞．细胞调，转染ＣＣＮＯｓｉＲＮＡ实验组较对照组调亡细胞增加约１７％左右（Ｐ＜０．０５）。结论１．ＣＣＮＯ在宫颈癌组织中的表达髙于癌旁组织；２－ｓ．祀向ＣＣＮＯｉＲＮＡ可抑制宫颈腺癌Ｈｅｌａ细

6、胞中内源性ＣＣＮＯ的表也３．ＣＣＮＯ对体外培养的宫颈腺癌Ｈｅｌａ细胞具有促进细胞増殖、促进细胞周期转化和抑制调亡作用。关键词：宫颈痛；ＧＣＮＯ；细胞増盛细胞周期巧调亡２ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＣＣＮＯＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎＢｉｏｌｏｉｃａｌｇＢｅｈａｖｉｏｒｓｏｆＣｅｒｖｉｃａｌＣａｎｃｅｒＨｅｌａＣｅｌｌｓＡｂｓｔ化ａｃＢａｃｋｇｒｏｕｎｄ：Ｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｍａｌｉｇｎａｎｔ【ｈ１ｍｏｒｓａｎｄｔｈｅ４ｃａｕｓｅｏ

7、ｆｄｅａｔｈｉｎｆｅｍａｌｅｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔｓｗｈｉｃｈｈａｓａｒｉｓｉｎｍｏｒｂｉｄｉｔ；ｕ，ｐ，ｇｙｉ．ｉｉｉｆｅｉｉ打ｒｅｃｅｎｔｅａｒｓｅｓｅｃｉａｌｌｉｎ过ｅｖｅｌｏｉｎｃｏｕｎｔｒｅｓＩｎａｄｄｔｏｎｔｏＨＰＶｎｃｔｏｎｔｈｅｙ，，ｐｙｐｇ＊ａｎｏｍａｌｙｇｅｎｅｅｘｐｉｅｓｓｉｏｎｒｅｌａｔｅｄ１：０ｃｅｌｌｇｒｏｗ也（ｉｉｆｅｒｅｉｉｔｉａｔｉｏｎｉｎｈｏｓｔｃｅｌｌａｌｓｏｐｌａｙｓａｎｉｍ