肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定.pdf

《肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、1094ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMollrnmu~to1)201l，27(10)·论著·文章编号：1007—8738(2011)10—1094—05肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定刘保才，霍景瑞，刘英富，范国才，王清明(军事医学科学院放射与辐射医学研究所，蛋白质组学国家重点实验室，北京蛋白质组研究中心，北京102206)Preparationandcharacterizationof[摘要]目的：制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb)。

2、方法：重组表达HCCR—l蛋白用于动物免疫，monoclonalantibodyagainstHCCR用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep—HCCR)protein检测血清抗体效价及筛选阳性克隆。通过ELISA、Westernblot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性LIUBao—cai，HUOring—rui，LIU，MⅣGuo—质。结果：获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株，通过cai，WANGQ-mingELISA方法测定抗体的亲和力常数为5．4×10。L／mol

3、；West—StateKeyLaboratoryofProteomics，BeijingProtomeResearchernblot结果显示，该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HC—Center，InstituteofRadiationMedicineAcademyofMilitaryMedi—CR一1和HCCR一2蛋白；免疫荧光检测显示，HCCR蛋白主要calScience，Beijing102206，China分布在细胞质和细胞膜中；免疫组化检测剑肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有。结

4、论：成功制备了1[Abstract]AIM：Preparationofmonoclonalantibody株抗HCCR特异性mAb，为建立基于HCCR的肝癌检测方法(mAb)toHCCR．whichisacandidatebiomarkerforhuman奠定了基础。hepatocellularcarcinoma(HCC)．METHODS：Therecom-[关键词]肝癌；HCCR；单克隆抗体binantproteinHCCR-1167360wasexpressedandwasused[中图分类号]R3

5、92．11[文献标识码]BasimmunogentoimmunizemouseforgenerationofmAba—gainstHCCR．TheproteinEp-HCCR，whichdisplayeda原发性肝癌是比较常见的恶性肿瘤，由于其起epitopeofHCCR，wasalsoexpressedandpurifiedtouseto病隐匿，早期症状不明显，多数患者在发现病情时已detectserumantibodytiterandtoscreenthepositiveclones是癌症晚期，错过

6、最佳治疗时间。寻找能够用于肝ofhybridmas．ThepropertiesofHCCRantibodywereana-lyzedbyELlSA．Westernblot．immunofluorescenceandim-癌早期检测的分子对于提高肝癌诊治效果具有重要munohistochemistry．RESULTS：Ahybridmasclone，which意义。2003年，韩国学者Ko等¨发现了人宫颈癌基secretedanti-HCCRmAb．wasobtained．Theafinitycon-因H

7、CCR，进一步研究结果显示，HCCR蛋白在肝癌stant(Kaf)0fthemAbis5．4x10。L／moIanalyzedby患者血清中的浓度显著高于肝硬化、非酒精性脂肪ELISA；WesternblotshowedthatthemAbcouldspecifically肝、慢性活动性肝炎等患者血清中浓度，而在正常人recognizeHCCR-1andHCCR-2expressedinHepG2cells：中HCCR是不表达或低表达的。因此，HCCR有ThemAbwasalsousedtodetect

8、theexpressionofHCCR望成为肝癌检测的重要分子。proteinsinhepatomacellsandHCCtissues．Theresultsof本实验通过表达HCCR蛋白胞外区部分作为免immunofluorescenceindicatedthatHCCRproteinsmainlyIo—疫原免疫小鼠，制备了HCCR单克隆抗体(mAb)，为calizedontheplasmamembraneandcytoplasmofHe