环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定.pdf

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1、Vol-26No．1科技通报第26卷第1期Jan．2010BULLEⅡN0FSCIENCEANDTECHN0L0GY2010年1月环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定顾黎，一，孔蕴，刘围3，郜海涛，郗日沫。，王鹏1,2(1．山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室济南250100；2．国家糖工程技术研究中心济南250100；3．山东大学化学与化512学院济南250100)摘要：为了制备抗环丙沙星单克隆抗体，首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原。免疫BALB／c小鼠。取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细

2、胞SP2／O融合，HAT培养基筛选．有限稀释法克隆化，获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示，杂交瘤细胞染色体数目平均102条，培养上清的效价为1：1．28x10。，单抗腹水效价达1：1．024xl06，IC卯为68．31ng／mL，属于IgM型，轻链kappa，CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性，提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。．关键词：环丙沙星；药物残留；单克隆抗体中图分类号：Q819文献标识码：A文章编号：1001-7119(2010)01-0072-05Pre

3、parationandCharacterizationofAnti·ciprofloxacinMonoclonalAntibodyGULi．-，KONGYun，LIUWei，GA0Haitao，XIRimo，WANGeerie’(1．Statekeylaboratoryformicrobialtechnology，Schooloflifescience，Shandonguniversity，Jinan250100，China；2．Nationalglycoengineeringresearchcenter，Jinan250100

4、，China；3．Schoolofchemistryandchemicalengineering，Shandonguniversity，Jinan250100，China)Abstract：Fortheaimofpreparinganti-Ciprofloxacinmonoclonalantibody，theimmunogenCIP—cBSAandcoatingantigenCIP．cOVAweresynthesizedbyEDC-method．Ultraviolatewasusedtoidentifytheaboveartif

5、icialantigens．BALB／cmicewereimmunizedbyCIP-cBSA．SpleencellsofthemicewithhighesttiterwerefusedwithSP2／0cells，afterselectionwithHATmediumandlimitingcolonization．onehybfidomacelllinestablesecretingMcAbwasestablished．MaincharacteristicsoftheacquiredMcAbwereidentified．The

6、resultsshowedtl1atthehybridomacellshadaround102chromosomes．thetiterofthehybridomacellsupernatantandaseiteswere1：1．28×l03andl：1．024xl06respectively，determinedbyindirectELISA．111eIC50was68．31ng／ml，andtheisotypeofMcAbinasciteswasIgM／K．ThespecificitydeterminedbyCI．ELISAs

7、howedthattheMcAbhadlittlecrossreactivitytootherfluoroquinolonesantibiotics，exceptEnrofloxacinandDanofloxacinmesylate．ThepreparedCIPMcAbwashigh—titer，sensitiveandspecific，andthenhopefultobefurtherdevelopedtodetectCIPrediduesinanimalfoods．Keywords；ciprofloxacin；drugres

8、idue；monoclonalantibody环丙沙星(ciprofloxacin，CIP)属于氟喹诺酮体内超标残留可能引起人类不良反应和细菌耐类(fluoroquinolones，FQs)抗生素中的一种，由于药性的发生，同时影响我国动物性食品的外贸出抗菌活性强