环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析.pdf

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1、中国免疫学杂志2010年第26卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2010．06．013环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析①胡鲲黄宣运②姜有声方伟③杨先乐(上海海洋大学水产与生命学院，上海201306)中国图书分类号R446．6文献标识码A文章编号1000-484X(2010)06-0538-06[摘要】目的：制备环丙沙星单克隆抗体，并分析其免疫学特性，为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法：用人工抗原环丙沙星．小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB／c小鼠，产生预期免疫应答后，将小鼠脾细胞与瘤细胞融合，经初筛、复筛和再

2、克隆，筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和831756株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果：1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a；6H2和8F5的抗体亚型为IgG1；6Gll的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD，轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中，细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1：6．4×102和1：5．6×105，亲和力常数可达2．85×109L／mol，

3、ICso值可达245．86n异／ml，最低检测限为45．25ng／ml，对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应，与恩诺沙星存在交叉反应，交叉反应率为84．6％。结论：本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性，可用于环丙沙星残留免疫学检测。[关键词]环丙沙星；单克隆抗体；亚型；亲和力；交叉反应GenerationofthemonoclonalantibodyagainstCiprofloxacinanda~ysisforitsim-munologicaltraitsHUKun，HUAN

4、GXuan—Yun，JIANGYou-Sheng，FANGWei，YANGXian—Le．Col~geofFisheriesandScience，ShanghaiOceanUnive~ity，Shanghai201306，China[Abstract]Objective：Togeneratemoneclonalantibodiesagainsteipmfloxacin(CIP)andtoanalyzeitsimmunologicaltraitsforestab—lishingadeterminationmethodforcipmfloxacinresi

5、duesinfoodtissues．Methods：BALB／cmicewereimmunizedbytheconjugationofCIP-BSAsuccessfully．ThespleniccellsofBALB／emiceandtheoncocytewerefusedandscreenedinHATculturemedium．Celstrainsof1C9，3F6，6H2，6A7，6G11and8175werecloned，whichcouldsecretthemon~lonalantibody(Mab)forcipmfloxacin．Resul

6、ts：ByEⅡSAmethod，thehaplotypeofMabswereidentified．Theantibody~cmtedby1C9，3F5and6A7wereclassifiedtotheIgG2a．Thoseof6H2and8F5wereclassifedtotheIgG1while6G11toIgG3．TheresultsofSDS-PAGEshowedthattheMabproteinWasmadeupoftheweightchainandthelightchainwhosemolecularweightwere50kDand25kD

7、．respectively．AllofthoseMabshadfinespecificityandsensibility．TheindirectELISAtiterof1C9Was1：6．4×102insupernatantand1：56×lOsinascites．．Theatilnityof1C9Was2．85×109L／molandthevalueofIG50reachedto245．86ng／na．Theproteinsecretedby1C9WasscreenedforestablishingtheELISAmethodandthedetect

8、ivelimitationreachedto45．25ng／m1．Therewerenocro