水稻条纹叶枯病毒单克隆抗体的制备及其特性研究.pdf

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1、第31卷第1期扬州大学学报(农业与生命科学版)V0}．31NO．12010年3月JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)Mar．2010水稻条纹叶枯病毒单克隆抗体的制备及其特性研究戈林泉，赵伟春。，祝树德，娄永根(1．浙江大学昆虫科学研究所，浙江杭州310029；2．扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州2250093．浙江中医药大学生物工程学院，浙江杭州310053)摘要：以提纯的水稻条纹叶枯病毒(RSV)粒子作为抗原免疫BALB／c小鼠脾细胞，并与SP2／0骨髓瘤细胞融

2、合，经克隆筛选，获得1株能稳定分泌针对RSV蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1H2。利用该细胞株制备了腹水型单克隆抗体，经检测，该单克隆抗体的间接ELISA效价达1：1．024×10，且与水稻、灰飞虱、褐飞虱和白背飞虱的蛋白均不发生交叉反应，检测的灵敏度为抗原蛋白稀释1：2．14×10倍，对应的抗原浓度为25．89g·L-。。按常规饱和硫酸铵沉淀法纯化了单克隆抗体1H2，测定其IgG含量为6．05g·L。该单克隆抗体可用于监测田间RSV的发生动态。关键词：灰飞虱；水稻条纹叶枯病毒；单克隆抗体；ELISA中图分类号：S432．41文献标志码：A文章编号：16

3、71—4652(2010)01—0076—05ProductionofamonoclonalantibodytoricestripevirusandresearchofitscharacteristicsGELin—quan'，ZHAOWei—chun。，ZHUShu—de，LOUYong—gen(1．1nstofInsectSci，ZhejiangUniv，Hangzhou310029，China；2．CollofHortandPlantProt，YangzhouUniv，Yangzhou225009，China；3．CollofBioengin，Zh

4、ejiangMedUniv，Hangzhou310053，China)ABSTRACT：0necellstrainbyhybridomabridomacelllinesecretingmonoclonalantibodies(McAbs)againstRSVwasproducedbyfusingmousemyelomacells(SP2／0)withspleencellsfromBALB／cimmunizedbythepurificationRSVpar—ticles．whichwasnamed1HZ．Wepreparedaseitefluidstype

5、sofMeAbswith1HZ．Basedon1HZ，aMcAbagainstRSVwasdeveloped．andthetiteroftheMeAbwas1：1_024×10，whentestedbyindirectELISA．TheMcAbsdidn’tcross—reactwithproteinsextractedfromOryzasativa，Niaparvatalugens(Stil1)，Laodelphaxstratellsandsogatellafurciera(Horvath)virus．Dectectionofsensitivitywa

6、santigenprotein1：2．14×10dilution，andcorrespondingantigenchro—mawas25．89g·I．Themonoclonalantibody1H2waspurifiedbysaturated(NH4)2S04．ThecontentofIgGwas6．05g·I．TheresultssuggestthattheMcAbantibodycouldbeusedtodetectthedynamicofRSVinthefield．KEYWORDS：Niaparvatalugens(Sta1)；ricestripe

7、virus；monoclonalantibodies；ELISA水稻条纹叶枯病毒(RSV)属纤细病毒属，病毒粒子为直径3～8nm、长度不等的丝状体，其基因组由4种ssRNA组成l1]。RSV是水稻上一种重要的病毒，主要由媒介灰飞虱(LaodelphaxstriatellusFallen)经卵传播。我国于1962年在江苏、浙江首先发现RSV，目前该病害从南到北广泛分布于16个省[2]。近年来在江苏、浙江等地又广泛流行，造成水稻严重减产，威胁着我国粮食生产安全。目前，对于水稻条纹叶枯病的防治主要采取种植抗病品种和适期治虫相结合的措施[3]。在转基因工程防治水

8、稻条纹叶枯病的研究中，一般采取转cP基因及核酶策略，但效果均不理想l_d_6_。