赤点石斑鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析.pdf

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1、福建农业学报26(5)：687~690，2011FujianJournalofAgriculturalSciences文章编号：1008—0384I2011)05—687-04赤点石斑鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析陈红燕一，许斌福，林能锋，刘晓东，陈强，林天龙(1．福建省农业科学院生物技术研究所，福建福州350003；2．福建农林大学植物保护学院，福建福州350002)摘要：赤点石斑鱼血清免疫球蛋白经饱和硫酸铵沉淀，Sephrose-4B柱提纯后免疫BALB／c小鼠。经细胞融合和抗体分泌细胞筛选，获得2株抗石斑鱼免疫球蛋白的单克隆抗体，分别命名为Mab一8D6和

2、Mab一2D3，两株单抗的亚级份均为IgG，腹水抗体的ELISA效价为1O，对纯化的石斑鱼免疫球蛋白的检测灵敏度为62ng，其中Mab一2D3只与石斑鱼免疫球蛋白发生特异性结合，而Mab-8D6除了与石斑鱼免疫球蛋白产生反应外，还能与褐菖蚰、鲈鱼、大黄鱼等海水鱼血清免疫球蛋白发生交叉反应，与锦鲤、欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白产生微弱交叉反应。2株单抗Western-blotting反应特性相同，都只能识别非变性非还原条件下790kD大小的石斑鱼免疫球蛋白，而不能识别在变性条件下石斑鱼免疫球蛋白的重链和轻链。以上结果表明，Mab-2D3和Mab-8D6两株单抗所对应的抗原表位不同

3、，Mab一2D3特异性强，所对应的抗原表位是石斑鱼免疫球蛋白所特有的；而Mab-8D6交叉反应结果提示石斑鱼与被测的几种海水鱼的免疫球蛋白进化亲缘关系较近。关键词：赤点石斑鱼；免疫球蛋白；单克隆抗体中图分类号：S965文献标识码：AProductionandCharacterizationofMonoclonalAntibodiesAgainstEpinephelusakaaraIgCHENHong-yan，XUBin-fu，LINNeng-feng，LIUXiao-dong，CHENQiang，LINTian-long(1．InstituteofBiotechnolog

4、y，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350003，China；2．CollegeofPlantProtection。FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002，China)Abstract：Immunoglobulinofredspottedgrouper(Epinephelusakaara)，purifiedbysaturationammoniumsulfateprecipitationfollowwithSephrose-4Bch

5、romatography，wasusedasantigentoimmunizeBALB／cmice．Aftercellfusionandscreeningtheantibodysecretingcell，twohybridomacelllineswhichsecretingmonoclonalantibodies(Mab)againstE．akaaraIghadbeenestablished．Inisotypinganalysis，theresultsshowedthatbothMabswereIgG1．ELISAresultsshowedthattiterofascit

6、eswas10andsensitivityoftheMabstopurifiedE．akaaraIgwasaslowas62ng．FurtherexperimentsprovedthatMab一2D3onlyspecificallyboundtotheIgofE．akaara，whileMab一8D6notonlyabletorecognizetheIgofE．akaarabutalsorecognizesserumIgofsomemarinefishessuchasCuvieretValenciennes，Lateolabraxjaponicus，Pseudosciae

7、nacrocea．Mab-8D6alsohadlowlevelcrossreactionwiththeserumIgofCyprinuscarpioandAnguillaanguilla．Western-blottingrevealedthatbothMabscanrecognizedmolecularweight790kDIgofE．akaaraundernon-denaturedandnon-reducedconditions，whileneitheroftheMabscanrecognizedtheheavychaina