赤点石斑鱼神经坏死病毒主衣壳重组蛋白多克隆抗体的制备.pdf

《赤点石斑鱼神经坏死病毒主衣壳重组蛋白多克隆抗体的制备.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第6卷第6期南方水产Vo1．6．No．62010年12月SouthChinaFisheriesScienceDee．，2010doi：10．3969／j．issn．1673—2227．2010．06．002赤点石斑鱼神经坏死病毒主衣壳重组蛋白多克隆抗体的制备苏友禄，郭志勋，冯娟，闫云锋，喻达辉(中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州510300)摘要：把赤点石斑鱼(Epinephelusakaara)神经坏死病毒(RGNNV)主衣壳蛋白(MCP)基因的重组表达质粒载体pRSETA—MCP转化至大肠杆菌(Estherichiacoli)BL21(

2、DE3)，经IPTG诱导表达，SDS．PAGE显示表达的重组蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在，分子量约4J4．5kD。通过Ni—NTA—Agarose亲和层析柱纯化，经分析纯度达90％，之后免疫新西兰兔制备抗血清，ELISA效价达1：12800以上。Westernblot分析结果显示，该血清与表达的重组蛋白有较强反应，说明通过原核表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。关键词：赤点石斑鱼神经坏死病毒；主衣壳重组蛋白；多克隆抗体；免疫原性中图分类号：S917；S943文献标志码：A文章编号：1673—2227一(2010)06—0008—06Prepara

3、tionofpolyclonalantibodyformajorcapsidprotein(MCP)ofRGNNVSUYoulu，GUOZhixun，FENGJuan，YANYunfeng，YUDahui(SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Guangzhou510300，China)Abstract：WetransformedtherecombinantexpressionplasmidvectorpRSETA—MCPofmajorcaps

4、idproteingene(MCP)ofred—spot—tedgrouper(Epinephelusakaara)nervousnecrosisvirus(RGNNV)intoEstherichiacoliBL21(DE3)andinducedthebacterialcul—tureswithIPTG．SDS—PAGEanalysisshowsthattherecombinantproteinwiththemolecularweightof44．5kDispresentedintheformofinclusionbody．Therecombina

5、ntproteinispurifiedbyaffinitychromatographyonNi—NTA—Agarosecolumnwith90％purityandtheniSusedtoimmunizetheNewZealandrabbit．ELISAresultdemonstratesthatthetiterofantiserumiSover1：12800．Moreover．theWestern—blotresuhrevealsthattheantiserumhasastrongreactionwiththerecombinantproteine

6、xpressedfromE．coliBL21，andtheprokaryoticexpressionofrecombinantproteinisprovedtohavegoodimmunogenicity．Keywords：red—spottedgroupernervousnecrosisvirus(RGNNV)；majorcapsidrecombinantprotein；polyclonalantibody；immu—nogenicity鱼类神经坏死病毒(nervousnecrosisvirus，RNA(RNA1和RNA2)，RNA1的大小约3．

7、1kb，NNV)属于诺达病毒科(Nodaviridae)的B诺达病编码非结构A蛋白，RNA2的大小约1．4kb，编码毒属，是迄今发现的最小鱼类病毒，其基因组病毒衣壳蛋白，根据25种诺达病毒的外壳蛋包括2条正义的、不含有poly(A)末端的单链白基因部分核苷酸序列，将鱼类NNV分为4种血收稿日期：2010-06—16；修回日期：2010-07．14资助项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院南海水产研究所)资助项目(2008YD02，2008TS08)广东省科技计划项目(2005B20301016)作者简介：苏友禄(198

8、1一)，男，助理研究员，硕士，从事渔业生物病害防治研究。E-mail：vetsyl@163．con通讯作者：郭志勋，E—m