欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:55596151
大小:705.25 KB
页数:6页
时间:2020-05-20
《水牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、农业生物技术学报,2010年,第l8卷,第3期,第610—615页JournalofAgriculturalBiotechnology,2010,Vo1.18,No.3,610—615技术改进UpdatedTechnology水牛^y一干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析徐贤坤熊毅刘棋曾宪垠2’龙剑明31广西动物疫病预防控制中心,南宁,530001;2四川农业大学生命理学院,雅安,625014;3广西大学动物科学技术学院,南宁,530005通讯作者.xyzeng@sicau.edu.cn;lqzz888@
2、sina.tom摘要将原核表达的重组水牛(Bubalusbubalis)一干扰素成熟蛋白(IGST—WBWN-x)以100g/只剂量免疫8周龄Balb/c小鼠(musmusculus),经5次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以rHIS.WB.IFN—和rGST—WBITN-~/蛋白共同作为检测抗原进行间接ELISA检测,筛选并最终得到了2株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株(分别命名为1E4和4A11),分泌抗体亚型均为IgG1型,轻链均为K链。Western-blot.ting检测显示:2株
3、单克隆抗体与原核表达的r'~rBIFN.^y蛋白均能特异性结合,具有良好的免疫反应原性。关键词一干扰素,水牛,单克隆抗体PreparationandAnalysisofMonoclonalAntibodiesagainstWaterBuffaloInterferon.gammaXuXiankunXiongYiLiuQi’ZengXianyinLongJianming1GuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Nanning,530001;2Col
4、legeofLifeScience,SichuanAgriculturalUniversity,Yaan,625014;3CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning,530005‘Correspondingauthors,xyzeng@sicau.edu.en;lqzz888@sina.conlDOI:10.3969/j.issn.1674—7968.2010.03.031AbstractBALB/cmice(J7l淞m/.
5、~C淞)wereimmunizedfivetimesbypurifiedrecombinantbufa1o(Bubdusbubalis)interferon-gamma(rGST—WBIFN—)expressedinEscherichiacoliBL21(DE3)atadoseof100Ixgpermice.Murinemyelomasp2/0cellswerefused、^,ithsplenocytesfromtheimmunizedmice.AnindirectELISAUS—ingrecombin
6、antproteinrHIS—WBIFN一andrGST—WBIFN一ascoatingantigenwereusedtoscreenanti—body-producinghybridomas.Twohybridomascellstainscouldsteadilyproducemonoclonalantibody0VlcAbs)af-ter4cyclesofsubcloning.BothMcAbsblongingtoIgG1isotypeandKchain,showedpositivereaction
7、torHIS—WBIFN一^yinwesternblotting.KeywordsIFN一^v,Bufalo,Monoclonalantibody(McAb)一干扰素(WN一)具有免疫调节、抗病毒、抗肿(Cerrettieta1.,1986),国内外陆续开展和制备抗牛瘤、影响细胞分化等多种生物学功能,在免疫应答中IFN一的McAb(李瑞芳等,2006),并在特异性玎FN一^y具有重要作用。抗IFN一的单克隆抗体(McAb)作为单克隆抗体的基础上建立起抗原特异性ELISA方一种重要的研究、检测刀一^y的手
8、段,已被广泛应用法,对样本中的刀~进行定性定量分析。牛刀FN一于免疫机制研究(vanderMeideeta1.,1990)、疫苗免(BoIFN一)单抗在牛疫病检测中具有重要的价值,应疫效果评估(Rodrfguezeta1.,1998)、免疫功能检测用最为广泛的是在牛结核病的检测方面(Woodeta1.(Tary-tehmanneta1.,1998)等领域。自从牛一干扰1990)。与传统皮内变态方法(TST)相比,抗原特异性素(BoIFN一^
此文档下载收益归作者所有