水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备.pdf

《水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、动物医学进展，2013，34(6)：71—77ProgressinVeterinaryMedicine水牛IFN一在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备邹新峰。，郭爱珍，陈颖钰h。，胡长敏，王冰。，刘晓乐。，谢倩，姜勇。，张策，陈焕春(1．华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉430070；2．华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070；3．华中农业大学动物科技学院，湖北武汉430070)摘要：本研究旨在建立水牛IFN一(BubalusbubalusIFN一，BbIFN～7)体外释放检测法，为定量检测水牛IFN一、开发水牛结核病及其他疫病的检测技术奠定基础。克隆了水牛IFN一了

2、成熟肽基因片段，根据测序结果，在不改变氨基酸序列的情况下，将密码子替换成毕赤酵母偏爱密码子并合成全基因，进一步用毕赤酵母GSI15表达了水牛IFN一成熟肽基因。通过水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上检测了其抗病毒活性，抗VSV活性为7．44×10U／mL。利用酵母表达的水牛IFN一7蛋白免疫Balb／c小鼠，并筛选阳性杂交瘤细胞，获得5株高效价的单克隆抗体。利用该重组蛋白免疫日本长耳大白兔，得到高效价的抗水牛IFN一多克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及多克隆抗体建立了检测水牛IFN一7的双抗体夹心ELISA方法，检测灵敏度达到125pg／mL。通过建立的方法分别检测了原核表达的

3、奶牛IFN一7、梅花鹿IFN—y、弥猴IFN一7以及其他7种非相关重组蛋白，结果表明所建立的方法灵敏度高，特异性好。关键词：水牛；干扰素；毕赤酵母；双抗体夹心酶联免疫吸附试验；单克隆抗体中图分类号：$852．4文献标识码：A文章编号：1007—5038(2013)06—0071—07了干扰素(interferon一，IFN一7)是一种多功能密切联系，医学及兽医学上常利用检测IFN一进行生物活性多肽，具有抗感染、抗肿瘤活性和免疫调节传染病诊断。该方法灵敏度与特异性较高，显示等作用，如活化巨噬细胞、提高MHC工类和MHC出很大的应用前景[。]，其基本原理是曾经感染或发Ⅱ类分子的表达、促进抗原提

4、呈等，在机体抗感染与过病的人或动物，其T淋巴细胞被该病原如结核分免疫中发挥重要作用Ⅲ。基于IFN一与感染之间的支杆菌致敏，当在体外再次遇到相同抗原时，T淋巴收稿日期：2012—07—17基金项目：公益性行业科研专项“布鲁氏茵病、牛结核病防控技术研究”(200903027)；家畜生产运输过程中环境应激响应及调控技术研究(201003060)作者简介：邹新峰(1984一)，男，山东临沂人，硕士研究生，主要从事动物传染病学研究。*通讯作者DeterminationofEffectiveConstituentContentinToltrazurilNanoemulsionbyHPLCZHANGZh

5、i—mei，DENGXu—ming，SHENZhi—qiang。(1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun，Jilin，130062，China；2．ShandongBinzhouAnimalScience&VeterinaryMedicineInstitute，Binzhou，Shandong，256600．China)Abstract：Todeterminetoltrazuri1contentintoltrazurilnanoemulsionbyHPLC，samplesweresepa

6、ratedbyAgilentC18column(4．6mmX150mm，5m)，themobilephaseconsistedofpotassiumdihydrogenphos—phatebuffer(pH3)一acetonitrile(45：55)withflowrateat1．0mL／min．UVdetectionwavelengthwassetat240nm，columntemperatureat30℃，andsamplesizewas20uL．Thelinearrangeoftoltrazurilwas0．0625／~g／mL一100／~g／mL．Thelimitsofdetect

7、ionandquantificationwere5ng／mLand15ng／mL．re—spectivelyandtheaveragerecoverywas99．73％．Theresultsshowedthatthemethodissimple．sensitive．accurate，andcanbeusedforthequalitycontroloftoltrazurilintoltrazurilnanoemulsion