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《抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第35卷第7期中国预防兽医学报Vo1.35.No.72013年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1.2013doi:10.3969~.issn.1008-0589.2013.07.16抗猪PD—L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析彭金美,李登云,郭娟娟,安同庆,孙艳,吴玉全,陈家锃,冷超粮,田志军,童光志‘(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;2.中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室,上海
2、200241;3.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100)摘要:为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD.L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD.L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD.L1Fc蛋白的293T细胞作为抗原,采用间接免疫荧光试验筛选杂交瘤培养上清,获得两株稳定分泌抗猪PD.L1MAb的杂交瘤细胞系。MAb亚型鉴定均为IgG1型,轻链为K链。Westernblot试验表明这两株MAb
3、均可以特异性识别PD.L1蛋白。流式细胞检测结果显示这两株MAb可以识别表达于293T细胞膜表面的PD.L1分子,但不能阻断PD.L1分子与其受体PD.1的结合。这两株MAb的获得为研究PD一1/PD.L1通路与猪的某些感染性疾病发展进程的关系提供了必要的检测工具。关键词:PPD.L1分子;PD.1/PD.L1通路;单克隆抗体中图分类号:$852.4文献标识码:A文章编号:1008.0589(2013)07.0578.04Preparationoftheanti--porcinePD--L1monoclonalantibodi
4、esandanalysisoftheirimmunologicalcharacteristicsPENGJin—mei,LIDeng-yun,GUOJuan-juan,ANTong—qing,SUNYan,WUYu—quan,CHENJia-zeng,LENGChao—liang,TIANZhi~un,TONGGuang-zhi(1.DivisionofSwineInfectiousDiseases,StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology,HarbinVeterinaryRese
5、archInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China;2.DivisionofSwineInfectiousDiseases,ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Shanghai200241,China;3.CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling71210
6、0,China)Abstract:Topreparethemonoclonalantibody(MAb)againstporcineprogrammeddeath1ligand1(PD-L1),theextracellulardomainofPD-L1wasexpressedbypET32ainE.coliandusedtoimmunizeBALB/cmice.HybridomaswereproducedbyfusingSP2/0cellswithspleencellsfromimmunizedmice.Twohybridom
7、aswereidendifiedbyindirectimmunoflurescenceassayusing293TcellswhichexpressingPD-L1-Fcastheantigen.BothMAbswereIgG1subtybewithKchain.WesternblotassayshowedthattheMAbswereabletorecognizePD—L1proteinsspecifically.TheresultsfromflowcytometryanalysisindicatedthattheMAbsw
8、ereabletodetectporcinePD-L1expressedonthecellmembraneof293T,butunabletoblockthebindingbetweenPD-L1withitsreceptorPD-1.Inconclusion,thesetw
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