抗GbpAGBD单克隆抗体的制备及特性研究

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1、第四军医大学硕士学位论文抗GbpA-GBD单克隆抗体的制备及特性研究姓名：王小勇申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学（口内）指导教师：倪龙兴2003.4.1独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本八声明所呈交的论文是我1、八在导师指导下进行的研究工fIE及取得的研究喊果尽我所知．除了文中特别加I¨标注和致谢的地方9}，论文中不包含其他八已经发表或撰写过的研究成果，不包含本八或他八已申请学位或其他用途使用过的成果与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢申请学位论文与资料若有不实之处

2、，本八承担一切相关责任、一^论文作者签各：兰’11璺日期：兰翌至．』鱼保护知识产权声明本八完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在较攻读学位期f"-1论文工作的知识产权单位属第四军医大学本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署各单位∞然为第四军医大学学校有权保留送交论文的夏Ell件，允许论文被查闻相借阅；学校可以公布论文的全部或部分内客(保密内容除9})．可以采用影Ell、缩印或其他复制手段保存论文论姗者签各：曼尘复别Ⅲ签各：丞醢配日期：堕；，。英文缩写词表英文缩写AmpbDBSABsAbDMEMd

3、NTPEDTAEcolfGbpsGBDGTFHRPIgMcAbMSNCoDPAGEPBSPCRSDSscPv英文全名ampicillinbasepairbovineserumalbuminbispecificantibodydulbecco’smodifiedeaglemediumdeoxynucleosidetriphosphateethylenediaminetetraaceticacidEscherichiacolfglucan·bindingproteinsglucan·bindingdomainglycosyltr

4、ansferaseshorseradishperoxidaseimmunoglobulinmonoclonalantibodyMutansStreptococcinitrocelluloseopticaldensityPolyacrylamidegelectrophoresisphosphatebufferedsalinepolymerasechainreactionsodiumdodecylsulfatesinglechainFv中译名氨苄青霉素碱基对牛血清白蛋白双特异性抗体DMEM培养基脱氧核苷三磷酸乙二胺四乙酸大肠杆菌

5、葡聚糖结合蛋白葡聚糖结合区葡糖基转移酶辣根过氧化物酶免疫球蛋白单克隆抗体变形链球菌族硝酸纤维素光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链反应十二烷基硫酸纳单链抗体Fv段第151军医大学硕士学位论文抗GbpA—GBD单克隆抗体的制备及特性的研究硕士研究生导师王小勇倪龙兴副教授摘要龋病是三大非传染性疾病之一，发病广，危害大。变形链球菌族(MS)t==：x是目前公认的致龋菌，其中与人类龋病发生关系密切的是变形链球菌(S．mutans)和远缘链球菌(S．sobrinu，又称茸毛链球菌)。MS在牙面的粘附、增殖是其致龋的基础。目前防

6、龋研究主要围绕链球菌在牙面的粘附、聚集及增殖几个环节进行，介导MS在牙面粘附、聚集的毒力因子主要有表面蛋白抗原I／ii(Agl，1I)、葡糖基转移酶(GTFs)及葡聚糖结合蛋白(Gbps)。Ag¨II、GTFs及GbpB在免疫防龋中具有明显的保护性防龋作用，GbpA在氨基酸序列上与GTFs的葡聚糖结合区(GBD)高度同源，但其GBD在被动免疫防龋中的作用尚未见报道。由于被动免疫避免了主动免疫时可能出现的与宿主组织的交叉反应及其它副作用，直接作用于口腔，因此易被人们接受，受到越来越多的关注。第四军医大学礁±学位论支葛曼!I——

7、—————————————————————————————————————I≈I!曼苎曼!曼■曼曼苎罡!皇鼎!曼曼拦!曼!e!本研究分为两个部分：一、分泌抗GbpA—GBD单克隆抗体缨胞系的建立f主要实验内容氛括：1．杂交瘤细胞系的建立：以GBD为抗原，免疫Balb／c小鼠，通过B淋巴鳃糖杂交瘿技零，郎熙B辫巴纲腿与嚣髓蝮缨瞧SP2／0进行缨腿融合，经筛选和克隆化后，阐接ELISA法检测杂交瘸培箨上清中有特异性抗体分泌后，建立杂交瘸缅施系。2．杂交瘤细胞特性分析：用秋水仙素阻抑法对杂交瘤细胞特性进行染色俸数髫分拼。3．效价测

8、定及Ig类别鉴定：用琼脂糖凝胶双向扩散法检测抗体亚类。并检溅黢瘩效份。4．单觅隆抗体的纯讫：用饱和硫酸铵盐祈法，对单克隆抗体进行纯化。先后共融合2次，克黢生长率为100％，熙性率为35％，经过2～3次克隆化，获褥了6袜稳定分泌抗GBD的杂交瘤缩胞系，分舅4命名为2C9、3C5、3G1、3H