肝癌干细胞样细胞生物学特性初步研究及mir1301对肝癌细胞的影响

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1、第二军医大学博士学位论文细胞总RNA，用realtime．PCR检测转染后p65、13．catenin、p53、T9737、bcl-2、bcl。XL、caspase．3、easpase．8等基因的变化情况；WesternBlot检测相关蛋白表达情况；划痕实验观察细胞迁移能力；transwell小室检测细胞侵袭能力；MTT法观察细胞生长抑制情况。3．人肝癌细胞株HepG2，以CD90作为肝癌干细胞标记物，免疫磁珠法筛选CD90阳性细胞，提取细胞总RNA，用realtime．PCR检测miR．155、198、373、548c一5p、1289、1

2、45、375、874、1183、1324等水平，检测p65、B-catenin、p53、T9737、caspase一3、caspase．8、bcl．2、bel。XL等基因转录情况。选择miR-548c．5p顺式转染，用realtime．PCR检测转染后p65、B—catenin、p53、T9737、caspase一3、caspase一8、bcl-2、bcl—XL等基因mRNA表达情况。WesternBlot检测相关蛋白表达情况。结果：1．在肝癌组织中，miR．155、miR-198、miR一373、miR．520b、miR．1301表达下降

3、。miR．548c、miR．1289在肝癌组织表达增高。13．catenin、T9737基因表达下降。NF．kB、p53基因无明显变化。2．转染miR-1301后p53基因水平上调、P53蛋白增加，bcl．2、bel．XL基因水平下调，Bcl．2、Bcl．XL蛋白减少。转染miR．1301后，划痕实验观察到转染后细胞迁移能力，transwell小室观察到细胞侵袭力下降，细胞生长受到抑制。3．肝癌干细胞样细胞中miR-548c．5p、miR-145、miR．375、miR-874水平下降。miR-155、miR-198、miR．i289升高。

4、miR一373、miR-1183、miR-1324无明显变化。肝癌于细胞样细胞中caspase．3、bcl．2基因水平下调，caspase．8基因水平上调，Bcl—XL无明显变化，p65、13-catenin、p53、T9737等表达无明显变化。转染miR一548c一5p后肝癌干细胞样细胞中13-catenin、T9737、bcl．2、bcl—XL、Caspase．3基因水平下调，Bcl一2、Bcl．XL、Caspase．3蛋白水平下降，p65、p53、Caspase．8基因水平变化没有统计学意义。转染后transwell小室观察到细胞侵袭

5、力下降。结论肝癌组织中miRNA表达水平有变化。转染miR-155、198、373、520b等可引起P65、13-catenin、P53、T9737、Caspase-3、Caspase．8基因的变化，推测miR-155、198、373、520b等可miRNA对肝癌细胞的生物学特性产生重要影响。miR．1301可上调p53基因、下调bcl．2、bcl．XL基因。推测miR．1301总体上对肿瘤发生发展可能起抑制作用，但需要进一步研究。肝癌干细胞样细胞中，转染miR-548c．5pmimics后对Bcl一2、Bcl。XL、Caspase．3等多

6、个基因产生影响，这些说明miR．548c．5p可能在肝癌干细胞样细胞的凋亡．抗凋亡过程中起一定作用。肝癌干细胞样细胞中miR．145、miR一375、miR。874、miR．155、一2．肝癌干细胞样细胞生物学特性的初步研究)J,．miR-1301对肝癌细胞的影响miR．198、miR．1289等水平发生改变，这些说明miRNAs可能在肝癌干细胞的发生发展中起重要作用。肝癌干细胞样细胞caspase一3、bcl一2基因水平下调，easpase一8基因水平上调，推测肝癌干细胞样细胞可能存在凋亡．抗凋亡功能紊乱，从而影响肝癌细胞的生物学特性。关

7、键词：肝癌，干细胞，miRNA，凋亡，信号转导，抑癌基因．3．PrimarystudyonthelivercancerstemcellsandtheeffectsofmiR-1301onlivercancercellsabstractBackgroundHepatocellularcarcinoma(HCC)isacommonmalignanttumorinChina．ResearchershavelongbeensearchingforthecellularoriginandcausesofHCCtotrytofindeffectivep

8、reventiveandtreatmentmeasuresunderthehintsofthepathogenesisofHCC．Recentresearcheshaddisco