miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学特性的影响.pdf

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1、硕士学位论文miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学特性的影响EFFECTSOFMIR-1904ONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMOUSEHEPATOMACELLS刘佳朋哈尔滨工业大学2018年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学特性的影响硕士研究生：刘佳朋导师：吴琼教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：2018年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex

2、:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceEFFECTSOFMIR-1904ONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMOUSEHEPATOMACELLSCandidate:JiapengLiuSupervisor:Prof.QiongWuAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpecialty:BiologyAffiliation:SchoolofLifeScience&TechnologyDateof

3、Defence:June,2018Degree-Conferring-Institution:HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要Pde4d基因位于小鼠13号染色体上，其编码产物PDE4D（磷酸二酯酶4d）可以特异性降解cAMP，因而细胞的生命活动中发挥重要作用。miR-1904定位于小鼠Pde4d第8内含子内，是一种内含子microRNA。鉴于目前对miR-1904靶基因及功能研究较少，本论文以miR-1904为研究对象，分析了其在小鼠肝癌细胞中的表达及与宿主基因Pde4d的

4、靶向关系，并进一步研究了miR-1904对Hepa1-6细胞生物学行为的影响。首先本文鉴定了miR-1904与宿主基因Pde4d之间的靶向关系。首先在Hepa1-6细胞转染miR-1904mimics，外源性上调miR-1904，定量PCR和westernblot检测显示Pde4d的mRNA和蛋白质水平都出现了显著性下调；而转染miR-1904inhibitor后Pde4d表达出现显著性上调。随后双荧光素酶报告实验和挽救实验进一步证明Pde4d是miR-1904的靶基因。其次本文研究了miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学表型的影

5、响。在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中上调和抑制miR-1904的表达，检测到miR-1904抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭。细胞周期和细胞凋亡实验结果进一步证实了miR-1904是通过促进细胞凋亡而并非改变细胞周期来影响细胞增殖的。体内成瘤实验表明过表达miR-1904的肿瘤无论是生长速率还是肿瘤质量都出现显著性下降，说明miR-1904具有肿瘤抑制子的功能。综上所述，本研究验证了Pde4d是miR-1904的靶基因之一，miR-1904表达上调对小鼠肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤能力具有抑制作用，并促进

6、细胞凋亡。说明miR-1904可能作为抑癌miRNA在肿瘤发生和发展中起到作用，为进一步阐明miR-1904的生物学功能奠定了基础。关键字：肝癌细胞；内含子miRNA；Pde4d；miR-1904；I哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractPde4dislocatedonchromosome13inmouse,encodingproteinPDE4D(phosphodiesterase4D)whichcanspecificlydegradecAMP,thusplaysanimportantroleincellactivit

7、ies.miR-1904isoneintron-miRNAlocatedonthe8thintronofPde4d.SincetherehasbeenfewstudyaboutthetargetgeneandfunctionofmiR-1904,aseriesofexperimentsweredonetoanalyzetheexpressioninhepatomacellsandtoverifythetargetrelationshipbetweenmiR-1904andPde4d.Subsequently,effectsofm

8、iR-1904onbiologicalbehaviorcharacteristicsofHepa1-6cellswerestudied.Firstly,thetargetrelationshipbetweenmiR-1904andPde4dwasverified