三氧化二砷对小鼠肝脏祖细胞生物学特性的影响-论文.pdf

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1、2013年1O月第3O卷第1O期ChinJExpSurg，October2013，Vo1．30，No．10·2079··肝脏外科·三氧化二砷对小鼠肝脏祖细胞生物学特性的影响张钰王洪山锁涛付亮鲁超宋陆军【摘要】目的观察三氧化二砷(As：0)对小鼠肝脏祖细胞(AHPCs)增殖及代谢的影响。方法应用改良Seglen二步法原位灌注结合机械离心获取AHPCs，体外培养并持续观察超过40d。应用免疫荧光技术对AHPC及其形成的克隆进行白蛋白、甲胎蛋白(AFP)和细胞角蛋白19(CK19)染色。取原代培养12d的细胞随机分为3组：对照组(不含As：O，)、低浓度组(含2txmo

2、l／LAszO，)和高浓度组(含4I~mol／LAs：0)。干预48h后，采用免疫荧光法观察细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性细胞所占的比例，逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测Ki-67基因的表达，Westernblot技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中尿素浓度的变化。结果体外培养的AHPC可持续扩增超过40d，培养第1天强阳性表达白蛋白，培养第5天细胞克隆开始表达AFP，第35天表达CK19。阴性对照组所含Ki一67阳性细胞的比例较高(25．1±2．8)％，而As，0(2txmol／L)组[(18

3、．8±1．0)％]和As20(4Ixmol／L)组[(11．8±2．0)％]的Ki-67阳性细胞比例逐渐降低。Ki一67mRNA的表达量在AsO(2~mol／L)组(0．823±0．012)明显下降，并以As，0(4p,moL／L)组(0．309-4-0．002)降低最为明显。随着As：O，浓度的增加，PCNA表达逐渐下降，并呈剂量．效应关系。阴性对照组细胞代谢产物尿素浓度较高[(0．586±0．056)mmol／L]随着As2O3浓度增加As203(2~mol／L)组[(0．506±0．058)mmol／L]与As2O3(4txmol／L)组[(0．410±0．

4、045)mmol／L]尿素浓度逐渐下降。结论成功建立AHPC体外培养模型。As2O3能抑制原代AHPC的增殖，并降低其代谢能力。【关键词】三氧化二砷；肝脏祖细胞；增殖；细胞代谢EfectofarsenictrioxideonbiologicalbehaviorsofhepaticprogenitorcellsinmiceZHANGYu，WANGHong—shan，SUOTao，FULiang，LUChao，SONGLufun．DepartmentofGeneralSurgery，Zhong-shanHospitaZ．FudanUniversity．Shanghai

5、200032，C^inaCo~espondingauthor：SONGLn，Email：song．Lujun@勰一hospita1．sh．cn【Abstract】ObjectiveToexaminetheinhibitoryeffectofarsenictrioxideonhepaticprogenitorcellsfHPCs)culturedvitro．MethodsHPCswereisolatedbytwo．stepcollagenaseperfusionandme—chanicalcentfifugation．andobservedunderthephase

6、contrastmicroscopyforover40days．Thealbumin，alphafetalprotein(AFP)andcytokeratin19(CK19)stainingwasperformedonadultHPCsandtheircol—oniesbyimmunonuorescence．At12thday．primaryculturedaduhHPCswererandomlydividedintothreegroups：controlgroup(notreatment)，As203(2i~mol／L)groupandAs2O3(4p~mol／

7、L)group．Aftertreatmentfor48h．immunofluorescenceandreversetranseriptase—polymerasechainreaction(RT—PCR)wereperformedtoanalyzetheproteinandmRNAexpressionofproliferationcellnuclearantigen(Ki一67)．Theexpressionofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)wasdetectedbyusingWesternblotting．Urearel

8、eased