三氧化二砷对急性哮喘小鼠cd4+t细胞凋亡的影响及机制研究

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级10533三氧化二砷对急性哮喘小鼠CD4+T细胞凋亡的影响及机制研究rn'，’，’1'●，’●lneeneCtan(1meCnanlSmOtarSenlCtrlOXldeOntneCD4+Tcellapoptosisintheacuteast№amouse作者姓名：李坑学科专业：临床医学研究方向：内科学院、系(所)：湘雅二医院指导教师：向旭东教授论文答辩日期!哟叩答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明Y2423456j{

2、Jjl删I删I删脚删l狮删Ⅻ0姗本人声明，所呈交的学位

3、论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：李琉学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。

4、同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名．塑导师签名由虹日期．螋年』月丑博士学位论文中文摘要摘要第一章三氧化二砷对急性哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响目的(1)建立急性哮喘小鼠模型，并鉴定建立的模型是否成功；(2)观察三氧化二砷对急性哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响。方法将30只SPF级BALB／c雌性小鼠随机分为三组：正常组(PBS组)、哮喘组(OⅥ泖BS组)和三氧化二砷组(OvA／ATo组)，每组10只。所有小鼠适应性饲养一周后按以下

5、方法建立急性哮喘小鼠模型。PBS组于第1、13天经腹腔注射PBS缓冲液(PH7．2．7．4)0．2ml，第19．24天连续6天每天予以6mlPBS缓冲液(PH7-2．7．4)雾化30IIlin，每次雾化前30min予以腹腔注射PBS缓冲液(PH7．2．7．4)O．2ml；OⅥ岍BS组于第l、13天经腹腔注射OVA与氢氧化铝凝胶的混合溶液(10肚gOVA(GradeV)和2mg氢氧化铝凝胶溶于PBS缓冲液中，充分混匀)O．2ml，第19．24天连续6天每天予以5％OVA(GradeV)溶液6ml雾化30mill，每次雾化前3

6、0mill予以腹腔注射PBS缓冲液(PH7．2—7．4)0．2ml；0、，A／A1℃组于第1、13天腹腔注射OVA与氢氧化铝凝胶的混合溶液(10鹇OVA(研adeV)和2mg氢氧化铝凝胶溶于PBS缓冲液中，充分混匀)0．2“，第19．24天连续6天每天予以5％OVA(GradeV)溶液6ml雾化30min，每次雾化前30min予以腹腔注射三氧化二砷溶液(用量：2．5mg／l(g×小鼠体重，配成0．2m1溶液)。第25天处理所有小鼠，检测以下指标：(1)对小鼠的一般行为活动进行观察；(2)不同浓度的乙酰甲胆碱激发小鼠后，采用

7、有创肺阻抗法测定小鼠的气道反应性；(3)收集BALF行细胞计数及分类；(4)肺组织病理切片观察炎症细胞浸润及黏液分泌情况。计量资料以均数士标准差(i±S)表示。各组数据先行正态检验和方差齐性检验，如果数据不符合正态分布，则经自然对数转换为正态分布的数据。若数据方差不齐，则行Dunnett’sT3法。多组均数间比较采用单因素方差分析malysisofva时a11ce，ANO、後)，各组间两两比较采用LSD检验。尸

8、重均无明显差异。致敏阶段：各组小鼠的腹腔注射部位无红肿、溃烂。激发阶段：PBS组小鼠饮食正常，活动灵敏，皮毛清洁有光泽，OⅥ帅BS组小鼠早期出现兴奋、打喷嚏、抓耳挠腮，后期出现匍匐不起、嗜睡症状，OVA／ATO组小鼠出现打喷嚏、兴奋的症状较0Ⅵ价BS组轻，无嗜睡症状。而且，实验全程OVA／ATo组小鼠没有活动减少、厌食、体重减轻等异常症状。OⅥ帅BS组小鼠气道反应性较PBS组显著增高(尸<0．05)：而OVA／A1℃组小鼠气道反应性较OⅥ竹BS组明显降低(火0．05)。0Ⅵ泖BS组小鼠BALF中自细胞总数为21．11士3．

9、28×104／ml、嗜酸性粒细胞数为3．10士0．50×104／ml、淋巴细胞数为6．60士O．97×104／ml、中性粒细胞数为4．92士O．45×104／ml，较PBS组均显著增加(均尸<0．01)；OVA／AT0组BALF中自细胞总数为13．04士2．58×104／ml、嗜酸性粒细胞数为1．06士