褪黑素对哮喘小鼠cd4+t淋巴细胞免疫功能影响的实验研究

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1、分类号R392密级公开UDC硕士学位论文+褪黑素对哮喘小鼠CD4T淋巴细胞免疫功能影响的实验研究学位申请人：文丹丹学科专业：免疫学指导教师：王敏教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicine+TheEffectofMelatoninonImmuneFunctionofCD4TLymphocyteinAsthmaticMiceGraduateStudent:WenDandanMajor:ImmunologySupervisor:Pro

2、f.WangMinChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位

3、论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：通过使用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠动物模型，设立不+同的实验对照组，探讨褪黑素(MT)对哮喘小鼠CD4T淋巴细胞免疫功能的影响及其作用机制。方法：选择40只6周龄SPF

4、级雌性BALB/c小鼠，随机分为正常对照组、哮喘组、褪黑素组、地塞米松(DXM)组，每组10只。采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠动物模型。药物治疗组以褪黑素及地塞米松溶液腹腔注射；正常对照组与哮喘组以等量生理盐水腹腔注射。各组小鼠末次雾化吸入24h内，苏木素-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况；支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数炎性细胞及嗜酸性粒细胞+(EOS)；流式细胞术(FCM)检测各组小鼠外周血中CD4T淋巴细胞数目；酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的水平；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中T-bet、R

5、OR-γt、GATA3、Foxp3mRNA表达水平的含量。结果：(1)成功建立哮喘小鼠动物模型，各组小鼠肺组织病理学观察发现正常对照组结构清晰，各级支气管上皮完整,肺泡间隔正常,基本无炎症细胞浸润；哮喘组小鼠支气管黏膜增厚，皱襞增多,管腔明显狭窄,气道上皮损伤、脱落明显，气道内可见黏液栓，气道周围组织疏松水肿，细支气管及伴行血管周围有大量炎症细胞浸润，肺间质及肺泡腔内可见嗜酸性粒细胞，杯状细胞增生；褪黑素组和地塞米松组与哮喘组相比，支气管和血管周围炎症明显减轻，与对照组比较，无明显差异。(2)与正常对照组相比较，哮喘组气道炎症、BALF中炎症细胞总数和EOS细胞计数、外周血中+C

6、D4T淋巴细胞数目、血清中IL-4水平以及肺组织中ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表达水平明显增高(p<0.05)，血清IL-2和IFN-γ水平以及肺组织中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表达水平明显降低(p<0.05)。与哮喘组比较，治疗组气道炎症、BALF细胞计数和EOS+细胞计数、外周血中CD4T淋巴细胞数目、血清中IL-4水平以及肺组织中ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表达水平均明显降低(p<0.05)，而血清IL-2和IFN-γ水平以及肺组织中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表达水平明显增高(p<0.05)。两治疗组比较，T-bet、Foxp3mRNA蛋白表

7、达水平有统计学差异，余各项指标无明显差异(p>0.05)。结论：(1)褪黑素可抑制哮喘小鼠的气道炎症，其抑制作用可能与抑制炎症细胞+和EOS细胞的表达有关。(2)褪黑素有效减少哮喘小鼠外周血CD4T淋巴细胞数目，并能改善外周血清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平及肺组织中T-bet、ROR-γt、GATA3、Foxp3mRNA表达水平的失衡，褪黑素有效减轻哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性可能是通过对这些炎症细胞及因子的调节起作用，在哮喘的防治中有良好的应用前景。+关键词：褪黑素支