生姜对小鼠免疫功能影响的实验研究

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1、生姜对小鼠免疫功能影响的实验研究作者：熊平源马丙娜郭明雄【关键词】生姜　　摘要:目的:了解生姜对小鼠免疫功能的影响。方法:①PFC法检测小鼠脾细胞抗体生成水平;②常规法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性;③3H-TdR摄入法检测小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性;④乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾脏NK细胞杀伤活性。结果:与空白对照组比较，在有效剂量范围内，生姜能促进脾细胞抗体的生成，能增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性及细胞毒活性，能增强NK细胞杀伤活性。结论:生姜具有调节机体免疫功能的作用。　　关键词:生姜;腹腔巨噬细胞;免疫功能　　姜科植物生姜为临床

2、常用中药，民间用生姜治疗风寒感冒和风湿痛等具有良好的解热、镇痛、抗炎等作用。生姜对机体免疫机能等因素是否有影响值得探讨。本研究仅就生姜对小鼠脾细胞抗体生成水平、腹腔巨噬细胞吞噬活性、腹腔巨噬细胞细胞毒活性、脾脏NK细胞杀伤活性等功能的影响进行了研究。　　1材料　　1.1动物Balb/c品系小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由北京大学医学部实验动物中心提供。　　1.2生姜市售当年鲜姜。生姜煎煮液的制备:将生姜洗净凉干后切成薄片，称重，每100g加蒸馏水500ml，置100ml的烧瓶中，放4℃冰箱中浸泡1h，加热煮沸，弱火维持40min，双层纱

3、布过滤，滤液浓缩至原体积的1/10，即为100/100生姜原液（1g/ml）。浓缩液放4℃冰箱备用（普通冰箱保存4天，室温保存2天）。　　1.3主要试剂Lps为sigma公司产品，重组人TNF为军事医学科学院生物制剂发展中心产品，L929细胞株由北京大学医学部免疫学系提供。　　1.4主要仪器CO2培养箱为美国NapCO.产品，倒置生物显微镜为重庆光学仪器厂产品，DYQ-III型多头细胞收集器为绍兴医疗器械厂产品，DG3022型酶联免疫测定仪为华东电子管厂产品，LS-5801型液体闪烁计数器为美国Backman公司产品。　　2方法与结果　　将

4、小鼠随机分成4组，每组10只。空白对照组:每只每日用1ml生理盐水，连续灌胃10d;生姜I组:0.25g/日/公斤体重连续灌胃10d;生姜II组:0.5g/日/公斤体重连续灌胃10d;生姜III组:1g/日/公斤体重连续灌胃10d。　　2.1生姜对小鼠脾细胞抗体形成的影响1］采取PFC检测法［1］，于喂药第6天一次性腹腔注射2.5%SRBC0.4ml免疫小鼠。免疫后第5天常规取脾，制成2×107/ml单细胞悬液，于96孔平底板上，每个样品设6个复孔，每个试验孔中加入2×107/ml脾细胞悬液100μl、0.25%SR-BC50μl、1∶8补

5、体50μl。37℃孵育1h，1000r/min离心10min，取上清置酶标仪上测各孔OD413值。结果见表1。　　2.2生姜对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响于喂药后的第8天，取6%淀粉肉汤1ml腹腔注射小鼠，24h后重复一次。实验前腹腔注射3～4mlHank's液4～5ml，1500r/min×10min，弃上清，加入10%小牛血清RPMI1640调细胞浓度至2～3×106/ml，加入1×107/ml白色念珠菌悬液1ml，混匀后37℃孵育1h。1000r/min离心5min，弃上清，留少许上清将沉淀吸匀，取一滴置于载玻片上，加0.05%美蓝

6、一滴，加盖玻片，5min后镜检计数100个巨噬细胞，分别计算其吞噬百分率和吞噬指数［2］。结果见表2。表1生姜对小鼠脾细胞抗体形成的影响*注:*与空白对照组比较。表2生姜对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响注:*与空白对照组比较，P<0.01。　　2.3生姜对小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性的影响用3H-TdR标记的L929细胞（靶细胞），将制备好的小鼠腹腔巨噬细胞悬液加入96孔培养板中，100μl/孔（浓度为1×106/ml），培养4h，洗出悬浮细胞，加入10μlLPSj继续培养8h，取上清作为TNF待测样品。加入3H-TdR标记的L929细

7、胞100μl（效靶比为5∶1），同时设靶细胞对照孔注:*与空白对照组比较。　　2.4生姜对小鼠NK细胞杀伤活性的影响［4，5］采取乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾脏NK细胞杀伤活性，并按下列公式计算NK细胞杀伤活性:NK细胞杀伤活性（%）=实验孔OD490值-自然释放孔OD490值最大释放孔OD490值-自然释放孔OD490值×100%结果见表4。表4生姜对小鼠NK细胞杀伤活性的影响注:*与空白对照组比较。　　3讨论　　单核巨噬细胞是重要的固有免疫的效应细胞，其通过氧依赖性杀菌系统和氧非依赖性杀菌系统识别、杀伤、清除病原体等抗原性异物;

8、活化的单核巨噬细胞通过分泌MIP-1α/β、MCP-1和IL-8等细胞因子参与和促进炎症反应，分泌的TNF-α能诱导肿瘤及病毒感染等靶细胞凋亡。此外，单核巨噬细胞还是专职抗原处理