莪术对小鼠免疫功能影响的研究

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1、莪术对小鼠免疫功能影响的研究【关键词】莪术；,,,小鼠；,,,白介素　　摘要：目的探讨莪术对小鼠免疫功能的影响。方法用100%莪术对水煎液定期给小鼠连续灌胃10d，1次/d，检测其对小鼠抗体产生能力、淋巴细胞增殖以及白介素2（IL-2）产生的影响。结果莪术对以上免疫学指标均有明显增强作用，与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。结论莪术对小鼠免疫功能具有一定增强作用。　　关键词：莪术；小鼠；白介素2；抗体生成能力；淋巴细胞　　Abstract:ObjectiveThisexperimentist

2、odiscusstheinfluenceofZedorayonmouse'simmunefunction.Methods1640为GIBCO分司产品；小牛血清为杭州四季青公司产品；LPS和ConA为美国Sigma公司产品；MTT为Fluca公司产品；二甲基亚砜（DMSO）购自上海生工生物工程分司；电泳仪；眼科手术器械等。　　1.1.2主要仪器Model450型酶标仪（美国BIORAD分司）；CO2培养箱（丹麦HETO公司）；低速冷冻离心机（美国Beckman公司）；超净工作台（苏州净化设备厂）；1

3、00目不锈钢网；50ml离心管等。　　1.1.3动物分组与给药健康BALB/C小鼠24只，体质量18~22g，雌雄各半，由潍坊医学院动物中心提供。将动物随机分为两组，每组12只，Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为莪术处理组。Ⅰ组和Ⅱ组分别用生理盐水和莪术原液灌胃，1次/d，0.5ml/（次/只），两组持续灌胃共10d。　　1.2检测指标和方法　　1.2.1定量溶血分光光度测定法（QHS）本法用体外B细胞分泌的抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量（OD值）表示，其结果可反映机体体液免疫功能。实验第5天分别将5

4、%的绵羊红细胞0.2ml注入各组小鼠腹腔内，第11天眼球放血，颈椎脱臼处死小鼠，常规取脾脏，然后进行脾细胞计数。调细胞浓度至1×109ml加1ml，取脾细胞1ml，1∶10新鲜豚鼠血清（补体）1ml，0.2%绵羊红细胞（SRBC）1ml混匀，37℃水浴1h，1500r/min离心10min，以上清液于全自动酶标仪450nm波长处测OD值，作为QHS反应值〔2〕。　　1.2.2淋巴细胞增殖反应无菌制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI1640不完全培养液洗涤3次，每次1500r/min离心10min，然后每

5、含10%牛血清的完全培养液配成1×109ml，取100μl加入96孔细胞培养板，加入终浓度为5μg/ml的ConA，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h后，无菌条件下加入MTT（5mg/ml）10μl孔，37℃5%CO2温箱掺入4h，不再继续培养12h，最后加入DMSO100μl，微量振荡器充分震荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析〔3〕。　　1.2.3小鼠腹腔巨噬细胞和IL-2的诱生与检测无菌制备小鼠脾细胞悬液：用RPMI1640不完全培养液洗涤2次，每次1000r/m

6、in离心10min，然后用含10%牛血清的完全培养液配成1×109ml，置细胞培养瓶中，37℃，5%CO2培养箱中培养42h，离心收集上清液，置-20℃冰箱保存备用。制备活化的脾淋巴细胞：无菌取正常小鼠脾脏，制成1×109ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度5mg/L，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h，收集细胞，离心洗涤2次，用完全RPMI1640配成悬液作为检测ⅠL2的反应细胞。IL-2活性检测：取-20℃冰箱保存的IL-2上清液，作1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL

7、-2上清液或不同稀释度的IL-2上清液100μl以及上述反应细胞100μl；阴性对照只加100μlRPMI1640培养液，各设4个复孔，于37℃，5%CO2培养箱中培养48h，每孔加MTT（5mg/ml）10μl，继续培养4h，吸弃100μl上清液，补加入DMSO100μl，微量振荡器充分振荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析。　　1.3统计学处理实验数据以均数±标准差（±s）表示，应用SPSS10.0统计学软件进行方差分析和t检验。　　2结果　　莪术对小鼠淋巴细胞增殖、抗

8、体形成及IL-2产生均有促进作用，与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。具体结果见表1。　　3讨论　　莪术为姜科植物莪术、郁金或广西莪术的根茎。味辛、苦、性温、归肝、脾经，有行气破瘀、消积止痛之功效，为临床常用药〔1〕。现代研究证实，莪术的化学成分主要含挥发油，其成分为莪术呋喃烯铜、龙脑、莪术醇等，其药理作用为抗肿瘤，增加动脉血流量以及抗早孕等〔4，5〕。临床上主要用于治疗积滞胀痛、血瘀腹痛、肝脾肿大、血滞经闭、跌打损伤等疾病。国内有学者应用莪术治疗小儿上呼道感染取得较好的治疗