三氧化二砷对小鼠结肠癌ct26细胞及其移植瘤影响实验的研究

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1、／I⋯IIIIIlllllllll．111111111111舢㈣删Y1844§苓苓。综述⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯··⋯··⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．．．．⋯⋯‘67攻读硕士学位期间发表学术论文题目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯77致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．"78论文声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯79论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯80___●_____●________________________

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3、VMTTNSODPBSPAGErpmSP、VB英文全称缩略词表AbbreviationBovineSerumAlbumincancerstemcellcolonCanCereelldimethylsulphoxideEthylenediaminetetraceticacidhaemtoxylinandeosinimmunocytochemistryimmunohistochemistryInhibitionrateintravenousinjectionOpticalDensityphosphatebufferedsalinep

4、olyacrylamidegelelectrophoresisrollsperminutesidepopulationcellWesternblot中文全称三氧化二砷牛血清蛋白肿瘤干细胞结直肠癌细胞二甲亚砜．乙二胺四乙酸苏木素一伊红免疫细胞化学免疫组织化学抑制率静脉注射四甲基偶氮唑蓝生理盐水光密度磷酸盐缓冲液聚丙烯酰胺凝胶电泳每分钟转速侧群细胞免疫印迹‘}／r～l●一～徐州I医学院顺I：学位论义三氧化二砷对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤影响的实验研究呋中文摘要目的研究三氧化二砷(As203)对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤作

5、用的生物学效应。探讨As203对其中的干细胞种群的影响和作用机制。为As203应用于大肠癌的临床治疗提供理论基础和实验依据。方法1．体外实验：培养小鼠结肠癌细胞株CT26，应用不同浓度的As203(1．O、2．0、4．0、8．Ol上mol／L)分别作用于细胞24h、48h、72h。用MTT法分别检测各个时l’日J不同浓度As203对细胞的抑制率；在倒置显微镜下观察A8203作用后各组细胞中形态学特征的变化；应用免疫细胞化学(SP法)检测各实验组细胞中CDl33和Musashi．1的表达；应用Westernblot方法分别测定各组

6、细胞中EPCAM、CD44、Bax、Caspase．3的表达。2．体内实验：大量的培养扩增CT26细胞，取对数生长期细胞制成细胞悬液在小鼠腋窝皮下接种。反复传代两三次后，建立小鼠皮下移植瘤模型。待模型成功复制后，将荷瘤小鼠随机分为3组：生理盐水组、As203低浓度组(治疗剂量为1．0mg／kg．d)、As203高浓度组(治疗剂量为2．0mg／kg．d)。连续用药10天，术次用药后24小时拉颈处死小鼠。分别测量各组小鼠体重、肿瘤重量和肿瘤体积，计算各组肿瘤抑制率；分别取各自肿瘤组织以及肺、肝、肾、脾、等脏器，固定后取材做蜡块，HE

7、染色镜下观察其组织结构的变化；采用免疫组织化学(IHC)SP法检测瘤组织内CDl33、EPCAM、CD44、Ki67、Survivin、Bax、Caspase．3等的表达情况。应用Westernblot方法测定各各组肿瘤组织中Musashi．1和CD34的表达。结果1．体外实验：(1)细胞增殖抑制实验(MTT)显示：不同浓度的As203(1．0、2．0、4．0、8．01上mol／L)作用CT26细胞24、48、72h后，与阴性对照组相比，细胞．．★P◆0毋～徐州医学院硕士学位论文增殖受到不同程度的抑制。As203作用24h后抑制

8、作用较弱，抑制率为7．49％～40．25％。而作用72h后其抑制作用较明显，抑制率为45．38％"'80．55％，各组间及与对照组比较，差异有统计学意义(氏O．05)。不同浓度的As203对CT26的增殖抑制作用随着As203浓度的升高和作用时间的延长越来越明显