小鼠结肠癌EpCAM+CD44+细胞对肿瘤区脉管生成的作用及三氧化二砷对其的影响.pdf

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1、_●l^。I小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40创新与不足⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40论文图片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．50综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66ICCmCⅡtⅣⅣ【TTNS0DPBSRPMimmunocytochemistry免疫细胞化学Inhibitionrate免疫组

3、织化学抑制率静脉注射Methylthiazolyltetrazolium四甲基偶氮唑蓝NormalsalineOpticalDensity生理盐水光密度phosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液rollsperminute每分钟转速————1肠癌的临床治疗提供理论基础和实验依据。方法1．体外实验：培养人大肠癌SW620细胞株，应用不同浓度的As203(1．0、2．0、4．0、8．01maol／L)分别作用于细胞2411、48h、72h。用MTT法分别检测各个时间不同浓度As203对细胞的抑制率；Hoeehst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化；应用

4、免疫细胞化学(PV法)检测各实验组细胞中MMP．9的表达。2．体内实验：复苏并大量培养扩增小鼠大肠癌CT26细胞，取对数生长期细胞制成细胞悬液在小鼠腋窝皮下接种。反复传代两三次后，建立小鼠皮下移植瘤模型。模型成功后，将小鼠随机分为3组：生理盐水组、As203低剂量治疗组(治疗剂量为1．Omg／kg·d)、As203高剂量治疗组(治疗剂量为2．0mg／kg·d)。连续用药lO天，给药期间每日观察各组小鼠生活情况及移植瘤生长情况，末次用药后24小时处死小鼠。分别测量各组小鼠体重、肿瘤重量和肿瘤体积，计算各组肿瘤抑制率；采用免疫组织化学(IHC)PV法检测瘤组织EpCAM、CD4

5、4、VEGF-C、MMP-9、podoplanin、CD31、VEGFR一1和VEGFR-3的表达情况，并且计数微淋巴管密度(MLD)与微血管密度(MVD)。结果1．体外实验：(1)细胞增殖抑制实验(MTT)显示：不同浓度的As203(1．0、2．0、4．0、8．0lamol／L)作用SW620细胞24、48、72h后，与实验对照组(01．tmol／LAs203)相比，细胞增殖受到不同程度的抑制。各组间及与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0．05)。不同浓度的As203对SW620的增殖抑制作2徐州医学院硕士学位论文用随着As203浓度的升高和作用时间的延长越来越明显

6、，即呈时间．浓度效应依赖性。(2)Hoechst33258荧光染色法结果显示：随着药物干预组As203浓度的升高，荧光染色可见细胞核染色质凝聚、边集、固缩、形成凋亡小体以及核碎裂的形态学改变。(3)免疫细胞化学结果显示：各浓度药物干预组中MMP．9阳性表达明显降低，且随着As203浓度增高，其降低作用越来越明显。各组间及与阴性对照组相比，差异均有统计学意义(伙O．05)。2．体内实验：(1)与生理盐水组相比，As203药物干预组中小鼠的皮下移植瘤生长均受到不同程度的抑制，以高浓度组的抑制作用更为明显(氏O．05)。生理盐水组、As203低剂量组、As203高剂量组肿瘤的重量

7、分别为1．21±O．33、O．75±O．20、0．47±0．21(g)。(2)免疫组织化学显示：与生理盐水组相比，各浓度药物干预组中EpCAM、CD44、VEGF·C、MMP-9、podoplanin、CD31、VEGFR一1和VEGFR-3的表达均不同程度降低，各组间及与生理盐水组相比，差异均有统计学意义(P<0．05)，EpC：OVI、CD44与VEGF．C的表达均具有明显的相关性(氏O．01)，VEGF．C与VEGFR-1和VEGFR．3的表达均具有明显的相关性(P