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《肝癌干细胞筛选及oct, abcg 对其耐药性影响的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、肝癌干细胞筛选及Oct4、ABCG2对其耐药性影响的初步研究贾茜1，高建1，张小丽1，向颖1，邓涛2（400010重庆，重庆医科大学附属第二医院：消化内科1；M5G2M1Toronto,Ontario,Canada,TorontoGeneralResearchInstitute，UniversityofToronto2）[摘要]目的富集培养肝癌干细胞，初步探讨八聚体4（Oct4）和ATP结合盒转运蛋白ABCG2在肝癌细胞及肝癌干细胞中的表达及其对耐药性的影响。方法使用流式细胞仪从肝癌细胞中分选肝癌干细胞，无血清培养肝癌干细胞球。实验分为肝癌细胞组及肝癌干细胞组（检测HepG2、Hep3B
2、两种细胞系）。单细胞克隆形成实验分析检测细胞增殖能力。分别给予肝癌细胞及肝癌干细胞阿霉素处理，MTT法测阿霉素处理后各组细胞的存活率，PCR法及westernblot法分别检测各组细胞CD90，CD133，Oct4及ABCG2基因mRNA及蛋白水平的表达。结果肝癌干细胞单个细胞增殖能力强于肝癌细胞，克隆形成分析显示14d克隆形成率Hep3B细胞组为8/27（30%）、Hep3BCSCs组为12/23（52%），p<0.05；HepG2细胞组克隆形成率为7/38（18%）、HepG2CSCs组为9/27（35%），p<0.05。用阿霉素处理肝癌细胞及肝癌干细胞后，MTT法测定结果显示肝癌干
3、细胞组细胞活性高于肝癌细胞组，处理48h后各组细胞活性：HepG2细胞组细胞活性为（38.17±6.92）%、HepG2CSCs组为（69.88±5.43）%，p<0.05；Hep3B细胞组（50.16±4.89）%，Hep3BCSCs组为（78.53±7.86）%，p<0.05。RT-PCR及qPCR结果显示肝癌干细胞组中CD90、CD133、Oct4及ABCG2基因mRNA表达较亲代细胞组显著上调（p<0.05）。Westernblot结果显示肝癌干细胞组Oct4及ABCG2蛋白水平显著上调，与亲代细胞组间表达差异有显著性（p<0.05）。结论CD90，CD133，Oct4及ABCG
4、2均高表达于肝癌干细胞，且Oct4及ABCG2与肝癌干细胞耐药性密切相关。[关键词]肝癌干细胞；CD90；CD133；Oct4；ABCG2；耐药性[中图法分类号]R735.7[文献标志码]AAnalysisofOct4andABCG2expressionandchemoresistanceinlivercancerstemcellsJiaQian1,GaoJian1,ZhangXiaoli1，XiangYing1,DengTao2（1DepartmentofGastroenterology,SecondAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversi
5、ty,Chongqing,China,400010,2M5G2M1Toronto,Ontario,Canada,TorontoGeneralResearchInstitute，UniversityofToronto）[Abstract]ObjectiveToenrichlivercancerstemcells(CSCs)and,explorethedifferentialexpressionandchemotherapyresistanceofoctamer4(Oct4)andtheATP-bindingcassettetransporterproteinABCG2betweenlive
6、rcancercellsandliverCSCs.MethodsLivercancerstemcells(detectHepG2,Hep3Bcelllines)wereisolatedbyflowcytometry,cellsculturedinserum-freemediumtoformspheres.Cellsweredividedintotwogroups,includinglivercancercellsgroupandliverCSCsgroup.Cellproliferationcapacitywasdetectedbysingle-cellclonogenicassay.C
7、ellactivitywasdetectedbyMTTassayafterdoxorubicinwaspretreated.TheexpressionofCD90,CD133,Oct4andABCG2genefrommRNAandproteinlevelwererespectivelydetectedbyPCRandwesternblot.ResultsSinglecellproliferationwasstrongerinlive
