人肝癌干细胞生物学行为的实验研究-论文.pdf

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1、中华肝脏外科手术学电子杂志2014年2月第3卷第1期ChinJHevatSurly(ElectronicEdition)，February2014，Vo1．3，No．1·41··基础研究人肝癌干细胞生物学行为的实验研究姜楠阮丹云李洋汪国营傅斌生汪根树李华张剑杨扬陈规划【摘要】目的探讨人肝癌干细胞的生物学行为。方法取对数生长期的人肝癌MHCC97H细胞接种至无血清培养基悬浮培养，获得稳定传代的人肝癌MHCC97H干细胞。分别取人肝癌MHCC97H干细胞微球和人肝癌MHCC97H细胞，应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞

2、标志物分化群(CD)133、CD90、上皮细胞黏附分子(EpCAM)信使核糖核酸(mRNA)。分别进行克隆形成实验、肿瘤细胞侵袭实验(Transwell实验)、裸鼠成瘤实验观察两种细胞克隆形成、侵袭性及成瘤情况。两种细胞实验数据比较采用t或t检验。结果人肝癌MHCC97H干细胞CD133、CD90、EpCAMmRNA含量分别为32．70-4-0．20、66．30+0．32、115．40-4-4．00，人肝癌MHCC97H细胞分别为1．27+0．29、13．60+1．36、1．34+0．40，人肝癌MHCC97H干细胞CD133

3、、CD90、EpCAMmRNA平均含量明显高于人肝癌MHCC97H细胞，_117．8，53．97，83．37；P<0．05)。人肝癌MHCC97H干细胞的克隆形成率为(213士1O)％，人肝癌MHCC97H细胞为(544-11)％，差异有统计学意义(卢13．11，P<0．05)。通过Transwell实验发现，人肝癌MHCC97H干细胞穿膜细胞数为(587-4-120)个／视野，人肝癌MHCC97H细胞为(97~13)个／视野，差异有统计学意义(t=-6．38，P<0．05)。在裸鼠成瘤实验中，接种2×10个人肝癌MHCC97

4、H干细胞的裸鼠4周可形成皮下移植瘤，成瘤率1／6；2x10个人肝癌MHCC97H干细胞可使全部裸鼠形成皮下移植瘤，成瘤率6／6；至少需要2×10个人肝癌MHCC97H细胞裸鼠才能形成皮下移植瘤，成瘤率2／6。结论与人肝癌MHCC97H细胞相比，人肝癌MHCC97H干细胞具有更强的侵袭性和更高的成瘤率。【关键词】肝肿瘤，实验性；干细胞；培养基，无血清；微球体ExperimentalresearchonthebiologicalbehaviorofhumanlivercancerstemcellsJiangNan*RuanDany

5、un，LiYang,WangGuoying,FuBinsheng,WangGenshu，LiHua,ZhangJian，,YangYang,ChenGuihua．iverTransplantationCente~theThirdAffiliatedHospitalofSunYat—SenUniversity,OrganTransplantationResearchInstituteofSunYat—senUniversity,OrganTransplantationResearchCenterofGuangdongProvin

6、ce，Guangzhou510630，ChinaCorrespondingauther：JiangNan，Email：njiang163@163．com【Abstract】ObjectiveTostudythebiologicalbehaviorofhumanlivercancerstemcells．MethodsHumanlivercancerMHCC97Hcellsinlogarithmicgrowthphasewereinoculatedintheserumfreemediumforsuspensioncultivati

7、onandhumanlivercancerMHCC97Hstemcellswithstablepropagationwereacquired．HumanlivercancerMHCC97HstemcellmicrospheresandhumanliverDuI：1O．3877／cma．j．issn．20953232．2014．01．011基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009cB522404)；国家十-32科技重大专项(2012ZX10002017一OO5)；国家自然科学基金(81000959)；中央高校基

8、本业务费青年教师培育项目(12ykpy47，12ykl：ly43)；广东省科技计划项目(2o09BO308O1o07)作者单位：510630广州，中山大学附属第三医院肝移植中心中山大学器官移植研究所广东省器官移植研究中心(姜楠、李洋、汪国营、傅斌生、汪根树、李华、张剑、杨扬、