人XPD基因转染对人肝癌细胞的生物学影响-论文.pdf

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1、江西中医学院学报2013年12月第25卷第6期JOURNALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM2013Vo1．25No．6胞的生物学影响院南昌330006；2．江西省分子医学重点实验室重大作用。本实验构建带有绿色荧光蛋白表达人野生型田胞株Hep3B细胞，探讨XPD基因与HBx，Cdk7的相互作eLa细胞克隆出人全长XPDcDNA，构建了pEGFP—N2一重组质粒Hep3B细胞(Hep3B—pEGFP—N2／XPD)和稳定镜观测绿色荧光蛋白表达，检测转染XPD基因后细胞内期变化。结果：(1)利用酶切和基因测序，成功构建了带

2、有。(2)免疫荧光显微镜下，Hep3B—pEGFP—N2和Hep3B一一PCR检洌4：Hep3B—pEGFP—N2／XPD细胞与Hep3B和：0．001)XPDmRNA表达明显增高(P<0．01)Cdk7mRNAXPD与两对照相比，细胞增殖率减弱(P<0．05)。TUNELI『曾加(P<0．01)。流式细胞仪检测示Hep3B—pEGFP—N2／●率逐渐增加。(5)Westernblot检测Hep3B—pEGFP—N2／良达量均比两对照组低，差异有统计学意义(P<0．001)．结}定转染进人肝癌细胞株Hep3B细胞中，-．J"rX在转录

3、和蛋白抑制细胞生长、促使细胞凋亡。关键词：肝脏肿瘤；XPDHBx；CDK7中图分类号：R735．7文献标识码：ABiologicalAlterationofHepatomaCellsTransfectedbyXPBinVitroXIONGYing，ZHANGji—xiang一，TANGLei1．ThekeylaboratoryofmolecularmedicineofJiangxiprovince，JiangxiNanchang330006；2．ThesecondaffiliatedhospitalofNanchangUniversi

4、ty，JiangxiNanchang330006Abstract：Background&Objective：AsapartofTFIIH，XPDgeneplaysakeyroleinNER．ToconstructtherecombinantplasmidpEGFP—N2一XPDandtransfecttheplasmidintothehumanhepatomacarcinomacelllineHep3B．Toinvestigatethero]eofwild—typeXPDincellcycleandapoptosisofhepatom

5、acellsanditsrelationshipwithHBxandCdk7．Methods：Thehumanfulllen~hXPDwasclonedbyRT—PCRusingthetotalRNAextractedfromHeLa．andwasinsertedintothepEGFP—N2plasmidvectorwhichexpres—sionthegreenfluorescenceprotein(GFP)．AndthenpEGFP—N2andpEGFP—N2一XPDweretransfectedintoHep3Bcelllin

6、ebyLi．pofectAMINE2000andselectedinmediumcontainingG418．4001xg·mL一fl0rHep3B—pEGFP—N2andHep3B—pEGFP—N2一XPD；Celllinesforcomparisonwerematchedonthesamegeneticbackgroundandpassage．Theexpressionofwild—typeXPD、HBxandCdk7weredetectedbyRT—PCRandWesternblot，cellgrowthwasdetectedb

7、yMTY，TUNELandFCMwereemployedforexami·ningthecellcycleandapoptosisofthetransfectedHep3Bcells．Results：1．WehavebuihthecombinationalplasmidpEGFP—N2一基金项目：国家自然科学基金资助项目(项目编号：30360037)。通讯作者：张吉翔，Tel：0791—86292706，E—mail：jixiangz@tom．corn。·15·江西中医学院学报2013年第25卷第6期XPD．2．Hep3B—pEGFP

8、—N2andHep3B—pEGFP—N2一XPDexpressthegreenfluorescenceproteinfGFP)whichcouldbedetec—tedundertheimmunofluoreseenec