人剪切修复基因xpd对肝癌细胞生长的抑制作用的论文

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1、人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用的论文【摘要】目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因d(xerodermapigmentosumd,xpd)对肝癌细胞smmc7721增殖的影响，并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染smmc7721细胞，转染重组质粒xpdn2和空载质粒n2，并用未转染的与xpdn2、n2具有相同遗传背景和代数的smmc7721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况，流式细胞仪检测细胞周期，逆转录聚合酶链反应（rtpcr）、yc、cdc25a、cd

2、k2表达量变化，mtt法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pegfpn2xpd用酶切鉴定，与genebank上的相符。在荧光显微镜下，可以在smmc7721pegfpn2、smmc7721pegfpn2xpd细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达，质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示，pegfpn2xpd重组质粒转染入细胞后，肝癌细胞进入s期发生阻滞，停滞在g1期。rtpcr、mc7721pegfpn2xpd细胞与smmc7721pegfpn2和smmc7721两对照组相

3、比，其xpd表达明显增高（p<0.05）。cmyc、cdc25a、cdk2相对表达量明显减少，差异有统计学意义（p<0.05）。与两对照组相比，smmc7721pegfpn2xpd细胞增殖率明显减弱（p<0.05）。.结论野生型xpd基因可以在转录和翻译水平抑制smmc7721细胞内cmyc、cdc25a、cdk2的表达。而且野生型xpd基因通过抑制cdk2的表达作用于s期dna损伤检控点，从而抑制smmc7721细胞增殖。【关键词】肝癌；xpd；cmyc；cdc25a；cdk2；d

4、na损伤检控点xerodermapigmentosumdgeneinhibitsproliferationofhumanhepatocellularcarcinomacelllinesmmc7721huangshenan1,xujiangjing2,zhangjixiang1,2,xiongying1,yindong2,lijun11．departmentofgastroenterology,thesecondaffiliatedhospitalofnanchanguniversity,nanchang,jia

5、ngxi330006,china；2．jiangxiprovincialkeylaboratoryofmolecularmedicinecorrespondingauthor:zhangjixiang,email:jixiangz@tom.abstract：objectivethexerodermapigmentosumd(xpd)geneplaysanimportantroleinthepathtodnarepair.ithasbeenreportedthatcellsobtainedhightumorsusce

6、ptibilityutationhappenedinxpdgene.thepurposeofthisstudyistoinvestigatetheinfluenceofxpdgeneinthegroacarcinomacells(hcc).methodspegfpn2andpegfpn2xpdmc7721celllinesbylipofectamine2000method.theexpressionofgreenfluorescentprotein(gfp)icroscope.cellcycleofthepla

7、smidtransfectedsmmc7721cellsetry(fcm).theexpressionsofyc,cdc25aandcdk2easuredbymttassay.resultstherebinantplasmidpegfpn2xpdmc7721cellsandgreenfluorescenceincellsicroscopy.around30%transfectionefficiencyent.inaddition,acellsfromsstagetog1stagetheexpressionof

8、xpdinsmmc7721pegfpn2xpdcellsmc7721andsmmc7721pegfpn2cells(p<0.05).theexpressionsofcmyc,cdc25aandcdk2insmmc7721pegfn2xpdcellsore,smmc7721pegfpn2xpd