人剪切修复基因XPD肝癌对人HepG2细胞中Rb和MAD2表达的影响-论文.pdf

《人剪切修复基因XPD肝癌对人HepG2细胞中Rb和MAD2表达的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·798·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology230()塑[文章编号】1000·4718(2014)05-0798-06人剪切修复基因XPD肝癌对人HepG2细胞中Rb和MAD2表达的影响木张庆燕．一，赵慧，罗文，张吉翔△(南昌大学’第二附属医院消化内科，江西省分子医学重点实验室，医学院，第二附属医院门诊部，江西南昌330006)[摘要]目的：探讨人剪切修复基因着色性干皮病D组基因(xerodermapigmentosumgroupD，XPD)转染人肝癌HepG2细胞后视网膜母细胞瘤蛋白(retinobla

2、stoma，Rb)和有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitoticarrestdeficient2，MAD2)表达的变化及对细胞增殖的影响。方法：将人工合成的pEGFP-N2．XPD重组质粒通过Lipofeetamine2000转染HepG2细胞。实验分为4组，分别为无转染HepG2细胞组(空白对照组)、脂质体转染HepG2细胞组(脂质体组)、空载质粒pEGFP．N2转染细胞组(N2组)和重组质粒pEGFP．N2-XPD转染细胞组(XPD组)。分别用RT-PCR和Westernblotting法检测各组细胞中XPD、Rb及MAD2mRNA和蛋白的表达量，用

3、MrITI’法检测各组细胞的增殖活力。流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况及细胞周期。结果：与其它3组相比，XPD组XPDmRNA及蛋白表达量明显升高(P<0．05)，RbmRNA及蛋白表达量明显升高(P<0．05)，而MAD2mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0．05)。XPD组细胞增殖活力显著降低，细胞凋亡率明显升高(P<0．05)。XPD组细胞停滞在G．期，难以进入s期。结论：XPD可以抑制MAD2的表达和肝癌细胞的增殖，促进Rb的表达。[关键词]肝肿瘤；着色性干皮病D组蛋白；视网膜母细胞瘤蛋白；有丝分裂阻滞缺陷蛋白2；细胞增殖；细胞凋亡[中图分

4、类号]R363【文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000-47I8．2014．05．005Efects0fXPDonexpressionofRbandMAD2inhumanhepatomaHepG2cellsZHANGQing-yan，ZHAOHui，LUOWen‘，ZHANGJi．xiang’'(。DepartmentofGastroenterology，TheSecondAffiliatedHospital，KeyLaboratoryofMolecularofJiangxiProvince，MedicalCollege，De

5、partmentofOutpatient，TheSecondAffiliatedHospital，NanchangUniversity，Nanchang330006，China．E—mail：1554308889@qq．con；jixiangz@tom．com)[ABSTRACT]AIM：ToinvestigatetheeffectsofxerodermapigmentosumgroupD(XPD)proteinonthegrowthofhumanhepatomaHepG2cellsandtheexpressionofretinoblastoma(

6、Rb)andmitoticarrestdeficient2(MAD2)pro—teins．METHODS：TherecombinantplasmidpEGFP-N2-XPDandemptyplasmidpEGFP—N2weretransfectedintoHepG2cellsbyLipofectamine2000．Thecellsweredividedinto4groupsincludingblankcontrolgroup，liposomegroup，pEG-FP-N2group(N2group)andpEGFP-N2一XPDgroup(XPDg

7、roup)．TheexpressionofXPD。RbandMAD2atmRNAandproteinlevelswasdetectedbyRT-PCRandWesternblotting．ThecellgrowthwasmeasuredbyMTYassay．Thecellapop·tosisandcellcyclewereanalyzedbyflowcytometry．RESULTS：OverexpressionofXPDup—regulatedtheexpressionofRb，anddown-regulatedtheexpressionofMA

8、D2atmRNAandproteinlevels．XPDinhibitedtheproliferationofHepG2c