lkb1基因转染对人肺腺癌细胞生物学行为的影响

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1、LKB1基因转染对人肺腺癌细胞生物学行为的影响作者：梁璇,南克俊,李春丽,姚煜,田涛,王淑红【摘要】　　目的:探讨外源性LKB1基因表达对人肺腺癌细胞生物学行为的影响。方法:应用巢式PCR方法扩增LKB1基因编码区,利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNALKB1质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblot检测LKB1和STAT3在A549细胞中的表达变化。通过绘制生长曲线和克隆形成试验检测获得性表达LKB1基因后肺癌细胞的增殖变化,流式细胞术(FCM)分析其细胞周期及其凋亡的变化。结果:成

2、功获得了稳定表达外源性LKB1基因的A549细胞系,与转染空白载体组比较,转染LKB1基因的细胞生长速度明显减慢,细胞周期中G1/G0期比例明显增加,S期比例减少,细胞凋亡率升高;同时STAT3蛋白的磷酸化水平明显降低。结论:LKB1可能通过下调STAT3蛋白磷酸化水平的表达从而抑制A549细胞的恶性生物学行为。　　AIM:TodeterminetheeffectsofexogenousLKB1geneonbiologicalbehavioroflungcarcinomacells.METHODS:NestPCRwasusedtocloneLKB1genepcDNA

3、LKB1andpcDNA3.1wereintroducedintoA549celllinebylipofectintransfection,andtheA549cellsstablyexpressingLKB1genewereestablishedbyG418selection.TheexpressionofLKB1andSTAT3proteinwas13detectedbyWesternblot.Cellproliferationwasobservedbygrowthcurveandcloneformation.Cellcycleandapoptosiswere

4、assayedbyflowcytometry(FCM).RESULTS:A549cellsstablyexpressingLKB1proteinwereestablished.Comparedwiththevectortransfectedcells,thepositiveclonecellsgrewmoreslowly.FCMshowedthatmorepositiveclonecellswentintophaseG0/G1andfewercellswentintophaseS.Moreover,therewassignificantdifferenceonapo

5、ptosisbetweenthetwogroupcells.CONCLUSION:LKB1proteinmightinhibitmalignantbiologicalbehaviorofA549cellspartlybydownregulatingthetyrosinephosphorylatedlevelofSTAT3protein.【关键词】LKB1;转染;增殖;凋亡;肿瘤;STAT3　　LKB1/STK11(serinetheronineproteinkinase11)基因是一种丝氨酸/苏氨酸激酶编码的蛋白,于1998年首次在PeutzJeghers肿瘤

6、综合症（PJS）患者中发现,其胚系突变是PJS患者的主要致病因素,也是易于罹患肿瘤的重要遗传学基础［1-3］。LKB1作为抑癌基因,可能在肺癌的发生发展过程中发挥着重要作用,但其机制尚未明确。为了对LKB1的功能进行更深入的研究,我们以不表达LKB1蛋白的肺腺癌细胞株A549为研究对象,成功地建立了表达外源性LKB1基因的细胞模型,13针对获得性表达外源性LKB1基因后A549细胞的生物学行为进行了研究,进一步探讨其可能的作用机制,为临床防治提供一定的线索。　　1材料和方法　　1.1材料TRIzol、逆转录试剂盒、OptiMEMI培养基、转染试剂Lipofect

7、amine2000、G418购自Invitrogen公司;质粒提取试剂盒购自Promega公司;蛋白裂解液购自PIERCE公司;鼠抗人His*Tag单克隆抗体(mAb)购自Novagen公司;鼠抗人actin抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠、羊抗兔二抗购自北京中杉试剂公司;兔抗人STAT多克隆抗体购自SantaCrus公司;预染蛋白质分子量标准、限制性内切酶、T4DNALigase购自NewEnglandBiolabs公司;感受态大肠杆菌DH5α购自北京博大泰克公司;pcDNA3.1载体由北京军事医学科学院二所四室馈赠;DNA合成及序列测定由北京奥科生