lkb1基因转染对肺癌细胞生物学行为的影响及放射增敏作用研究

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1、研究生个人简介张鑫君，女，28岁，山东滨州人2010年至今攻读徐州医学院肿瘤学专业硕士学位就读研究生期间修满学分34．5分通过国家CET-6考试获得国家执业医师资格目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’2材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一92方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一15结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘31讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘56攻读硕士学位期间发表学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一72临床培训小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·73致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·75论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·77论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯·77论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·78缩略词CCK．8DMSOEBEGFPFBSFCMLBmAbNCODPBSPAGESDSTAETEWB缩略词表Abbreviation英文全称中文全称Cellcountingkit．8CCK-8试剂盒Dimethylsulfoxide二甲基亚砜Ethidiumbromide溴化乙锭Enhancedgreenfluorescentprotein增强绿色荧光蛋白FatalbovineserumFlowcytometerluria-ber

4、tanimediumMonoelonalantibodyNitrocelluloseOpticaldens“yPhosphatebuffersalinePolyacrylamidegelelectrophoresisSodiumdodecylsulfate疗is．acetate．ED弘6nfferTris／ED弘bufferWesternblotting胎牛血清流式细胞仪LB培养基单克隆抗体醋酸纤维素光密度值磷酸盐生理盐水缓冲液聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠Tris／乙酸电泳缓冲液Tris．EDTA缓冲液免疫印迹LK

5、Bl基因转染对肺癌细胞生物学行为的影响及放射增敏作用研究中文摘要目的利用pEGFP．LKBl融合蛋白质粒过表达肺癌A549、H460细胞，联合照射，研究野生型LKBl抑癌基因对肺癌细胞生物学行为影响及其放射增敏作用，为提高肺癌疗效提供一定实验依据。方法构建融合质粒pEGFP．LKBl并鉴定。利用脂质体将融合质粒pEGFP．LKBl转染人肺癌细胞株A549、H460，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，Westemblot检测LKBl蛋白的表达。CCK．8法、流式细胞术和划痕实验等方法检测LKBl转染对前述肺癌细胞株增殖、细胞

6、周期分布、侵袭能力等生物学行为的影响。根据单靶多击模型和线性二次模型，集落形成实验绘制细胞存活曲线，计算D0、Dq、耐B和SER等放射生物学指标，检测LKBl的放射增敏作用；CCK-8法、流式细胞术测定细胞周期分布以及Wentemblot检测P53、P21蛋白表达，探讨LKBl基因可能的放射增敏机制。结果通过酶切鉴定和测序，证明pEGFP．LKBl融合质粒成功构建。转染LKBl基因后12、24、48、72h，在荧光显微镜下观察发现，24h时绿色荧光蛋白表达最多；Westernblot检测显示转染后24h，LK_B1蛋白

7、表达最强。CCK．8法检测显示，转染pEGFP．LKBl组OD值均小于空白组(Ctr)和阴性对照组(pEGFP)(氏0．05)。流式细胞术检测中，结果显示转染pEGFP．LKB1组G0／G1期细胞比例高于空白组和阴性对照组(P

8、求得生物学参数，A549细胞单独照射组和转染照射组分别为D0：2．759VS2．2041Dq：2．052VS1．333；彬p值：7．943VS11．288；SER-1．25。H460细胞中，单独照射组和转染照射组，DO：2．675，VS2．425；Dq：2．041VS1．467；∥D值：8．088VS9．437，SER：1．103