myod1和myog真核共表达载体构建及转染真皮成纤维细胞的实验研究

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1、分类号学校代码：10114密级学号：Dr2008045Myod1和Myog真核共表达载体构建及转染真皮成纤维细胞的实验研究研究生：高宏飞指导教师：梁炳生教授专业名称：外科学研究方向：骨骼肌修复与功能重建学位类型：科学学位所在学院：第二临床医学院中国山西二〇一三年五月三十日山西医科大学博士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………………4前言…………………………………………………………………………………6第一部分大鼠Myod1和Myog基因真核共表达载体的

2、构建……………………15前言…………………………………………………………………………………15材料和方法…………………………………………………………………………17结果…………………………………………………………………………………42讨论…………………………………………………………………………………44结论…………………………………………………………………………………48参考文献……………………………………………………………………………49第二部分大鼠真皮成纤维细胞的体外培养及鉴定………………………………52前言………………………………………………………

3、…………………………52材料和方法…………………………………………………………………………53结果…………………………………………………………………………………58讨论…………………………………………………………………………………61结论…………………………………………………………………………………65参考文献……………………………………………………………………………65第三部分Myod1和Myog真核共表达载体转染大鼠真皮成纤维细胞的实验研究……………………………………………………………………………………68前言……………………………………………………

4、……………………………68材料和方法…………………………………………………………………………69结果…………………………………………………………………………………76讨论…………………………………………………………………………………78结论…………………………………………………………………………………864山西医科大学博士学位论文参考文献……………………………………………………………………………87全文结论……………………………………………………………………………93创新点………………………………………………………………………………93综述1MRFs转录

5、因子的研究进展………………………………………………94综述2失神经支配骨骼肌萎缩的发病机制及其治疗方法的研究进展………118攻读学位期间发表文章情况………………………………………………………136致谢………………………………………………………………………………137个人简历……………………………………………………………………………1385山西医科大学博士学位论文Myod1和Myog真核共表达载体构建及转染真皮成纤维细胞的实验研究摘要目的：多年来，失神经支配骨骼肌萎缩始终是骨科学研究领域中的一个重要并亟需突破的理论难题，逆转骨骼肌纤维化的研究更加具有挑战性

6、。目前，运用转录因子进行基因治疗是极具潜力和应用前景的治疗方法，也是各个学科前沿研究的热点。在调控骨骼肌发生、分化和成熟的过程中，生肌调节因子家族发挥着决定性作用。因此，应用生肌调节因子进行基因治疗以逆转骨骼肌纤维化，可能具有较高的研究价值。以前的研究结果显示，针对失神经骨骼肌萎缩，利用单一基因进行基因治疗可以发挥一定的治疗作用，但是，总地来说疗效不佳，需要进一步提高。由于生肌调节因子家族中的各个成员在发挥调控骨骼肌分化的作用时，具有相互协同和相互促进的作用，因此探索双基因联合应用进行基因治疗以逆转骨骼肌纤维化是一项很有价值研究课题，能够为防治失神经支配

7、骨骼肌萎缩寻找新的思路，并且提供基础研究的实验依据。由于Myod1和Myog是生肌调节因子家族中最为重要的两个成员，因此，本研究选取Myod1和Myog作为研究对象，探讨二者联合基因转染对于诱导真皮成纤维细胞转分化成为成肌细胞的作用，以期为逆转失神经支配骨骼肌萎缩寻找新的治疗靶点。（1）通过克隆Myod1具基因和Myog基因的cDNA，构建Myod1和Myog各自的克隆载体，进一步构建Myod1和Myog二者的真核共表达载体，为下一步进行Myod1和Myog联合基因转染防治骨骼肌失神经萎缩的细胞学研究提供实验基础。（2）通过原代培养大鼠真皮成纤维细胞，为

8、下一步进行Myod1和Myog真核共表达载体体外转染的细胞学实验提供理想的细胞基