重组pcdna3.1hbmp7真核表达载体的构建及转染兔骨髓基质干细胞的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果重组pcDNA3.1hBMP7真核表达载体的构建及转染兔骨髓基质干细胞的实验研究【摘要】构建人骨形态发生蛋白-7(humanbonemorphogeneticprotEin7，hBMP7)基因真核表达载体，评价其转染兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的诱导成骨能力。［方法］从人类胎盘组织中克隆出hBMP7基因，与真核表达载体连接，成功构建了重组

2、hBMP7真核表达载体；从兔骨髓中分离培养BMSCs，分为3组：AhBMP7转染组；B空载体转染组；C未转染组。使用RTPCR、免疫组织化学等方法检测hBMP7在BMSCs中的表达。检测各组细胞碱性磷酸酶，胶原，骨钙蛋白合成情况。［结果］RTPCR、免疫组织化学检测显示经hBMP7转染的BMSCs中有BMP7表达。经hBMP7转染BMSCs的碱性磷酸酶于转染后第d显著增高，到第d达到最高;经hBMP7转染的BMSCs合成胶原、骨钙蛋白能力也显著提高，与转染空载体、未转染的BMSCs相比有显著性差异(P【关键词

3、】人骨形态发生蛋白基因转染骨髓基质干Abstract：［Objective］ToconstructarecombinanteukaryoticexpressionplasmidcarryinghumanBMPgenewhichwastransfectedintobone课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果marrows

4、tromalcells(BMSCs)invitroandexpressed.［Method］ClonehumanBMPcDNAfromaChinesewomanplacentawasrecombinantedwithplasmid,toconstructeukaryoticexpressioncarrierofrecombinauthBMP-7.TheBMSCswereisolatedfromrabbitbonemarrowandculturedinweredividedintothreegroups:pcDNA3.1hB

5、MPtransducedgroup;transducedgroup;untransducedexpressionofhBMPwasdetectedbyRTPCR,Immuneohistochemistry.ALP,Collogen,Osteocalcinproductionweredetected.［Result］ThehBMPtransducedBMSCsexpressedhBMPatbothmRNAandprotEInactivitywasdetectedinhBMPtransducedcellsfromda

6、ytoday10,peakingonday.Collogen,osteocalcinproductionwereelevatedsignificantlytoo(PKeywords：hBMP7;genestransfection;bonemarrowstromalcells骨形态发生蛋白7(BMP7)诱导成骨的能力己得到广泛证实，在临床上用来促进骨折愈合，关节间融合和防止人工假体松动等方面有良好的应用课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发

7、，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果前景。但仅靠外源性植入，BMP7在骨损伤部位存在的时间及浓度是有一定限度的，往往不能满足某些骨损伤修复的需要。作者设想利用转基因技术将人BMP7基因通过载体导入骨组织工程种子细胞(骨髓基质干细胞)，使种子细胞在骨损伤局部合成和分泌BMP7实现其诱导成骨作用，促进骨损伤的修复。在本实验中作者构建了重组hBMP7真核表达载体，并且选择兔骨髓基质干细胞作为基因转染的靶细胞，对其合成表达外源性BMP7及其

8、促进骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力进行了检测，为今后将基因转移技术用于骨组织工程打下良好的基础。1材料菌株、质粒和动物感受态大肠杆菌JM109购自Takara公司；真核表达载体购自Invitrogen公司；健康雄性新西兰大耳白兔(体重kg)由哈尔滨医科大学动