uch-l1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究

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1、硕士学位论文论文题目UCH-L1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究研究生姓名周磊指导教师姓名杨金铭专业名称药理学研究方向肿瘤药理论文提交日期2013年3月UCH-L1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究中文摘要UCH-L1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究中文摘要目的：研究UCH-L1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的影响并初步探讨其可能的分子机制。方法：我们使用UCH-L1siRNA靶向抑制恶性胶质瘤细胞U251和T98G中UCH-L1的表达。在缺氧环境下，1）采用划痕法、Matrigel法分别检测恶性

2、胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力的变化；2）采用台盼蓝、克隆集落实验检测恶性胶质瘤细胞的存活和增殖能力的变化；3）采用乳酸和葡萄糖试剂盒检测恶性胶质瘤细胞糖酵解能力的变化；4）用WesternBlot法检测缺氧情况下UCH-L1对凋亡相关蛋白表达和HIF-1α表达调控的影响。结果：1）划痕法和Matrigel法结果表明在缺氧环境下沉默UCH-L1后胶质瘤细胞U251和T98G的迁移能力、侵袭能力明显下降，提示UCH-L1能促进恶性胶质瘤细胞的侵袭和迁移；2）台盼蓝、克隆集落实验结果表明在缺氧环境下沉默UCH-L1后恶

3、性胶质瘤细胞U251和T98G的存活和增殖能力明显减弱，提示UCH-L1有助于恶性胶质瘤细胞缺氧环境下的增殖和存活；3）在缺氧环境下沉默UCH-L1后恶性胶质瘤细胞相关凋亡蛋白Caspase3、PARP的表达明显增加，提示UCH-L1能抑制恶性胶质瘤细胞凋亡的发生；4）在缺氧环境下沉默UCH-L1表达后恶性胶质瘤细胞U251和T98G的乳酸生成量和葡萄糖消耗量明显减少，提示UCH-L1能促进恶性胶质瘤细胞的糖酵解能力；5）在缺氧环境下沉默UCH-L1后恶性胶质瘤细胞HIF-1α蛋白水平明显降低，给予蛋白酶体抑制

4、剂MG132和LAC后HIF-1α部分恢复，提示UCH-L1可能通过泛素蛋白酶体途径调控HIF-1α蛋白的表达；6）在缺氧环境下沉默UCH-L1后，加入CHX处理不同时间后，恶性胶质瘤细胞HIF-1α蛋白的表达随着时间推移迅速减弱，提示UCH-L1能增强HIF-1α蛋白的稳定性。结论：UCH-L1可能通过阻止HIF-1α经泛素蛋白酶体途径降解，维持HIF-1α稳定I中文摘要UCH-L1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究性，提高糖酵解调控能力，从而抑制细胞凋亡，进而促进缺氧环境下恶性胶质瘤细胞的侵袭、运动迁移

5、、增殖和存活。关键词：恶性胶质瘤；UCH-L1；HIF-1α；糖酵解；细胞存活作者：周磊指导老师：杨金铭教授张丽讲师IIUCH-L1regulartheadaptationtohypoxiaofglioblastomamultiformecellsAbstractUCH-L1regulartheadaptationtohypoxiaofglioblastomamultiformecellsAbstractObjective:ToinvestigatetheeffectsofUCH-L1onviabilityan

6、dmalignantfeaturesofgliomacellsunderhypoxia,andtoexplorethemolecularmechanismsinvolved.Methods:TheexpressionofUCH-L1ingliomacellsU251andT98GwassilencedbyUCH-L1-targtedsiRNA.Underhypoxiacondition,1)theinvasionofgliomacellswasassessedbywound-healingassayandMat

7、rigelinvasionassay;2)thecellproliferationwasassessedbyclonogenicassay;cellviabilitywasassessedbytrypanblueassay;3)glycolysiswasassessedusingthelactateandglucoseassaykit;4)expressionofUCH-L1andtheapoptosisproteinsandHIF-1αweredeterminedusingWesternblot.Result

8、s:1)theresultsofwound-healingassayandmatrigelinvasionassayshowedthatthemigrationandinvasionofhumangliomacellsU251andT98GweredecreasedaftersilencingofUCH-L1expressionunderhypoxia,suggestingthatUC