acsdkp及gabab受体调控脑胶质瘤细胞增殖的信号机制研究

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1、分类号学号D200977314学校代码10487密级博士学位论文AcSDKP及GABAB受体调控脑胶质瘤细胞增殖的信号机制研究学位申请人：胡萍学科专业：生物化学与分子生物学指导教师：刘剑峰教授答辩日期：2014年1月10日万方数据万方数据ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofDoctorofPhilosophyandMolecularBiologyThesignalingmechanismofAcS

2、DKPandGABABreceptorregulatedglioblastomacellproliferationCandidate:PingHuMajor:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:Prof.JianfengLiuHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan430074,P.R.ChinaJan.,2014万方数据万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究

3、成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保

4、存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在_____年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据万方数据华中科技大学博士学位论文摘要Acetyl-N-Ser-Asp-Lys-Pro(AcSDKP)是由脯氨酰寡肽酶(POP)特异性地水解人体胸腺素β4氨基端而产生的天然产物。AcSDKP不仅可以抑制造血干细胞的增殖，并且可以促进新血管的生成。我们的前期研究发现在白血病及实体瘤等患者体内内源性的AcSDKP均高度表达。相比于正常的小鼠，

5、AcSDKP在患急性髓细胞样白血病小鼠的血浆和骨髓干细胞中的浓度高出5到10倍。同样，各种实体瘤（甲状腺、乳腺、结肠、脑部和颈椎、肾脏、肺部、皮肤、卵巢以及前列腺癌等）患者血液中AcSDKP的浓度显著高于健康个体。此外，也有一部分研究表明AcSDKP对癌症的发病机理没有帮助。到目前为止，AcSDKP在肿瘤发生中的作用机制并不清晰，其诱导的下游信号通路也研究甚少。我们的研究结果显示，外源AcSDKP对恶性肿瘤细胞增殖的影响并不明显。在AcSDKP含量比较高的恶性胶质瘤细胞U87-MG中，用来抑制细胞中内源A

6、cSDKP的生成的POPi（POP的特异性抑制剂，S17092）的浓度和抑制细胞增殖的POPi浓度并不是呈相关的。更有趣的是，高浓度POPi引起的U87-MG增殖水平的降低可以被外源加入的AcSKDP所恢复，而这种效应与PI3K/Akt通路的激活相关。但是POPi和AcSDKP的共处理并不能改变ERK的磷酸化水平。AcSDKP诱导的PI3K的两个催化亚基p110α和p110β对U87-MG细胞增殖调节的作用是不同的：用siRNA片段干扰掉p110α的表达可以阻止Akt磷酸化水平的恢复，而p110βRNA水

7、平表达的下调没有该效应。我们的发现首次证明了AcSDKP在PI3K/Akt这条信号通路上对细胞增殖的调节具有很重要的作用。GABAB受体作为G蛋白偶联受体C家族成员之一，已有报道暗示它在肿瘤的生长和侵袭中发挥着一定的功能，但其分子机制目前尚不明确。我们的前期研究结果显示GABAB受体被激活后能通过转激活IGF-1R保护细胞免受凋亡。除此之外，我们还发现单独的GB1asa能通过转激活IGFR诱导ERK的磷酸化，这也是首次发现单独的GB1能上膜行使独立的功能，暗示着GB1亚基在GABAB受体功能发挥中扮演着重

8、要的角色。在本课题中我们首先利用实时荧光定量PCR技术检测了GABABI万方数据华中科技大学博士学位论文受体在不同细胞系中的表达情况，发现它在肿瘤细胞中的分布是多样化的，而且GB1的mRNA表达水平远高于GB2。进一步发现GABAB受体特异性的激动剂Baclofen和阳性变构剂CGP7930能够明显地抑制脑胶质瘤细胞U87-MG的增殖。GABAB受体被激活后还能影响AKT、ERK、FAK和PKD等蛋白的磷酸化。除此之外，我们还