Lnc00665影响脑胶质瘤细胞增殖与迁移的机制研究.pdf

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1、硕士学位论文Lnc00665影响脑胶质瘤细胞增殖与迁移的机制研究THEMECHANISMOFLNC00665INFLUENCEONCELLPROLIFERATIONANDMIGRATIONINGLIOMA孙紫琳哈尔滨工业大学2018年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文Lnc00665影响脑胶质瘤细胞增殖与迁移的机制研究硕士研究生：孙紫琳导师：赫杰副教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：2018年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学Classi

2、fiedIndex:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceTHEMECHANISMOFLNC00665INFLUENCEONCELLPROLIFERATIONANDMIGRATIONINGLIOMACandidate：ZilinSunSupervisor：AssociateProf.HeJieAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：BiologyAffiliation：SchoolofLifeScience

3、andTechnologyDateofDefence：June,2018Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要近年研究表明，LncRNA通过对mRNA、蛋白等物质的调节来影响不同信号通路，在生命活动中起着重要作用。同时，其表达异常对肿瘤的发生和预后都有着至关重要的作用。目前，在已发表的文章中，未发现Lnc00665的相关报道，因此本文对Lnc00665的功能进行研究。课题组前期发现在脑胶质瘤细胞中，Lnc00665过表达可促进细

4、胞增殖、迁移与侵袭能力。为了对此功能进行进一步确认，本论文将从Lnc00665表达下调的角度，进一步研究Lnc00665对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。我们利用RNAi技术，对脑胶质瘤细胞中Lnc00665不同位点进行干扰，使Lnc00665表达下调并构建稳转细胞系。通过MTT增殖曲线实验及克隆形成实验发现，当Lnc00665表达下调时，胶质瘤细胞增殖速度显著降低；通过细胞周期、AnnexinV/PI双染实验和Caspase3/7活性分析发现，Lnc00665表达下调后，细胞周期时相被阻滞到G1期，而且细胞凋亡显著增加；通过qRT-P

5、CR发现，与细胞增殖相关的C-myc表达量在RNA水平显著降低。进一步利用Transwell小室进行迁移、侵袭实验发现，当Lnc00665表达下调时，胶质瘤细胞迁移侵袭能力明显下降；与迁移侵袭相关的Tenascin-C表达量显著降低。由此证明Lnc00665表达下调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。为了研究Lnc00665的调控机制，利用生物信息学分析发现，miR-1224-5p可能直接与Lnc00665相互作用。利用荧光素酶双报告系统实验，证实Lnc00665为miRNA-1224-5p的直接作用靶标。为了进一步研究miRNA

6、-1224-5p对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，我们将miRNA-1224-5pmimic转染到胶质瘤U251细胞中，通过MTT增殖曲线和克隆形成分析发现，当miRNA-1224-5p过表达后，U251细胞增殖能力明显降低；利用细胞周期分析发现，miRNA-1224-5p过表达后细胞周期时相被阻滞到G1期；同时，应用AnnexinV/PI双染实验与Caspase3/7的活性分析发现，当miRNA-1224-5p过表达后，细胞凋亡的数量显著增加，而且Lnc00665的过表达可以明显回复miRNA-1224-5p对胶质瘤细胞诱导凋

7、亡的效应；通过qRT-PCR发现，miRNA-1224-5p过表达后，C-myc表达水平明显降低。进一步利用Transwell小室实验发现，当miRNA-1224-5p过表达后，胶质瘤细胞迁移和侵袭能力明显下降，Tenascin-C表达量显著降低。由此证明miRNA-1224-5p表达上调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。I哈尔滨工业大学理学硕士学位论文上述实验结果证明miRNA-1224-5p通过调控Lnc00665的表达来抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。本研究为脑胶质瘤诊断和治疗提供一定的线索。关键词：脑胶质瘤；Ln

8、c00665；miRNA-1224-5pII哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractRecentstudieshasshownthatmiRNAsandLncRNAsplayanessentialro