九节龙皂苷-i对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究

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1、目录1九节龙皂苷一I对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究1．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．5结果⋯OOO⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．6讨论····⋯······⋯⋯·····⋯·······⋯⋯···⋯⋯⋯．．””⋯⋯．．⋯291．7结论⋯OOO⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯351．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯362英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯403致

2、谢⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯414中药抗肿瘤侵袭迁移的作用研究(综述)·····⋯⋯···⋯⋯··⋯⋯⋯··⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯“42f嬲{!；；『炒九节龙皂苷一I对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究摘要’目的：探讨九节龙全草提取物九节龙皂苷．I(Ardipusilloside．I，ADS．I)对体外培养人脑胶质瘤U87细胞在侵袭、迁移等生物学特征的影响及其可能的作用机制。方法：体外无菌培养人脑胶质瘤U87细胞，以不同浓度(O、2、4、8、16、32州)的ADS．I作用于U87细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察ADS．I在不同作用时间(

3、24、48、72h)对U87细胞增殖的影响；采用Transwelldx室侵袭迁移模型，于小室底部铺上含50mg·LJ的基底胶模拟人体内基底金属膜，给予不同浓度的ADS．I(1、3、5州)作用于体外培养的U87细胞，24h后观察细胞侵袭能力的改变；于六孔板中采用细胞划痕实验观察不同浓度的ADS．I(1、3、5州)在不同时间点(O、6、24h)对体外培养的U87细胞迁移能力的影响；采用明胶酶谱法，通过含有19·L‘1明胶的8％丙烯酰胺凝胶中观察不同浓度的ADS．I(1、3、5gM)对U87细胞所分泌的基质金属蛋白酶(Matrix．metalloproteinase，MMPs)活性的影

4、响；采用细胞免疫化学的方法，通过相应的抗体抗原结合，观察不同浓度的ADS．I(1、3、5州)作用U87细胞后，细胞g马MMPs在相应抗体下的阳性反应。结果：从MTT实验中观察到U87细胞在一定浓度的ADS．I作用下被抑制生长，并且这种抑制作用随着作用时间及药物浓度的增加而增加，ADS．I作用24h、48h、72h后的U87细胞的半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration，IC50)分别为8．02士O．160M、6．63土O．10肛M、5．414-0．050M。由于ADS．I在24d'时即表现出对U87细胞明显的抑制作用，受时间和经费的1限制，在后续实验中，

5、本研究选择ADS．I的作用时间点为24h，作用浓度为l、3、5州；Transwell实验、细胞划痕实验观察到经过ADSI作用后，与对照组相比，U87细胞迁移和侵袭能力明显降低。在Transwell实验中，浓度为3、5州ADS．I作用U87细胞24h后，抑制细胞侵袭的能力达到45％以上，而低浓度组不明显；细胞划痕实验中药物作用细胞随着时间延长，剂量越大的组显示出越强烈的抑制迁移作用，在24dx时，对照组迁移率为55．44％，1眦移率为50．02％，3oM为25．97％，50M为12．99％；明胶酶谱实验中观察到与对照组相比，经过ADS．I作用后，3、5州的ADS．I处理24d,时后

6、U87细胞所分泌的MMP．2明显降低，分别下降至73．22％和61．53％，而1gMADS．I处理24dx时后对U87分泌的MMP．2活性的抑制作用不明显。在细胞免疫化学中，显示经过DAB显色实验及显色程度对比，得出对照组与低剂量组染色呈深棕黄色(+++)，3、5小的ADS．I处理24小时后的细胞分别呈棕黄色(++)和浅棕黄色(+)，且IOD值随着药物浓度的增大而值越低，表明此蛋白的阳性率也随之降低，可以说明ADS．I作用于人脑胶质瘤U87细胞内啪．2活性明显降低，随着药物浓度的增加，抑制U87细胞内脚一2的作用越强。结论：一定浓度的ADS．I可体外抑制人脑胶质瘤U87细胞迁移和

7、侵袭能力，其机制可能与ADS．I降低细胞基底金属酶的活性相关。关键词：九节龙皂苷．I；胶质瘤细胞；迁移；侵袭；基质金属蛋白酶EffectsandmechanismofArdipusilloside-IoncellinvasionandmigrationabilityofgliomacellsAbstractObjective：ToinvestigatetheinfluenceofArdipusilloside—I，atriterpenoidsaponinisolatedfromA