九节龙皂苷-ⅰ对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究

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1、中图分类号：R965.2;R979.1;R285硕士学位论文九节龙皂苷-Ⅰ对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究院（系）、所研究生姓名学科、专业导师姓名二Ο一三年四月目录1九节龙皂苷-Ⅰ对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究…………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法……………………………………………………101.5结果………

2、……………………………………………………201.6讨论……………………………………………………………291.7结论……………………………………………………………351.8参考文献………………………………………………………362英汉缩略词对照表……………………………………………403致谢……………………………………………………………404中药抗肿瘤侵袭迁移的作用研究（综述）…………………………………………………………………41九节龙皂苷-Ⅰ对脑胶质瘤细胞侵袭迁移的作用及机制研究摘要目的：探讨九节龙全草提取物九节龙皂苷-Ⅰ（

3、Ardipusilloside-I，ADS-I）对体外培养人脑胶质瘤U87细胞在侵袭、迁移等生物学特征的影响及其可能的作用机制。方法：体外无菌培养人脑胶质瘤U87细胞，以不同浓度（0、2、4、8、16、32μM）的ADS-I作用于U87细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验观察ADS-I在不同作用时间（24、48、72h）对U87细胞增殖的影响；-1采用Transwell小室侵袭迁移模型，于小室底部铺上含50mg•L的基底胶模拟人体内基底金属膜，给予不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）作用于体外培养的U87细胞，24h

4、后观察细胞侵袭能力的改变；于六孔板中采用细胞划痕实验观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）在不同时间点（0、6、24h）-1对体外培养的U87细胞迁移能力的影响；采用明胶酶谱法，通过含有1g•L明胶的8%丙烯酰胺凝胶中观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）对U87细胞所分泌的基质金属蛋白酶（Matrix-metalloproteinase，MMPs）活性的影响；采用细胞免疫化学的方法，通过相应的抗体抗原结合，观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）作用U87细胞后，细胞内MMPs在相应抗体下的阳性反应。结果：从

5、MTT实验中观察到U87细胞在一定浓度的ADS-I作用下被抑制生长，并且这种抑制作用随着作用时间及药物浓度的增加而增加，ADS-I作用24h、48h、72h后的U87细胞的半数抑制浓度（50%inhibitingconcentration，IC50）分别为8.02±0.16μM、6.63±0.10μM、5.41±0.05μM。1由于ADS-I在24小时即表现出对U87细胞明显的抑制作用，受时间和经费的限制，在后续实验中，本研究选择ADS-I的作用时间点为24h，作用浓度为1、3、5μM；Transwell实验、细胞划痕实

6、验观察到经过ADSI作用后，与对照组相比，U87细胞迁移和侵袭能力明显降低。在Transwell实验中，浓度为3、5μMADS-I作用U87细胞24h后，抑制细胞侵袭的能力达到45%以上，而低浓度组不明显；细胞划痕实验中药物作用细胞随着时间延长，剂量越大的组显示出越强烈的抑制迁移作用，在24小时，对照组迁移率为55.44%，1μM迁移率为50.02%，3μM为25.97%，5μM为12.99%；明胶酶谱实验中观察到与对照组相比，经过ADS-I作用后，3、5μM的ADS-I处理24小时后U87细胞所分泌的MMP-2明显降低

7、，分别下降至73.22%和61.53%，而1μMADS-I处理24小时后对U87分泌的MMP-2活性的抑制作用不明显。在细胞免疫化学中，显示经过DAB显色实验及显色程度对比，得出对照组与低剂量组染色呈深棕黄色（+++），3、5μM的ADS-I处理24小时后的细胞分别呈棕黄色（++）和浅棕黄色（+），且IOD值随着药物浓度的增大而值越低，表明此蛋白的阳性率也随之降低，可以说明ADS-I作用于人脑胶质瘤U87细胞内MMP-2活性明显降低，随着药物浓度的增加，抑制U87细胞内MMP-2的作用越强。结论：一定浓度的ADS-I可体

8、外抑制人脑胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与ADS-I降低细胞基底金属酶的活性相关。关键词：九节龙皂苷-Ⅰ；胶质瘤细胞；迁移；侵袭；基质金属蛋白酶2EffectsandmechanismofArdipusilloside-Ⅰoncellinvasionandmigrationabilityofgliomac