开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究

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1、开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究作者：蔡晶，雷林生，朱正光，迟德彪【摘要】　　目的探讨开口箭皂苷体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制。方法开口箭皂苷作用于U251细胞后检测其IC50值。溶血实验观察开口箭皂苷对细胞膜的影响。提取U251细胞的DNA分析条带。RT-PCR技术检测开口箭皂苷对U251细胞的bax和bcl-2基因表达的影响。利用激光共聚焦显微技术研究开口箭皂苷对U251细胞内游离钙浓度和pH值的影响。结果开口箭皂苷对U251细胞的IC50值为8.5μg/ml。不能引起肉眼可见的溶血现象。开口箭皂苷诱发了肿瘤细胞的凋亡，并引起了bax基因表达量的升

2、高和bcl-2基因表达量的下降，并可引起U251细胞内游离钙浓度和pH值的降低。结论开口箭皂苷体外可以诱导U251细胞凋亡，其机制可能与上述实验结果有关。　【关键词】开口箭皂苷；U251细胞；凋亡；机制　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheunderlyingmechanismsofSTCBontheapoptoticinductionofhumanneurogliomacells.MethodsTheinhibitoryeffectofSTCBonU251celllineolysisofSTCBicroscopyandthehydrogenionc

3、oncentrationofU251cells.ResultsThe50%inhibitingconcentrationl.STCBdidnotcausehemolyticcrisisbutinducedtheapoptosisofU251cellsandthehydrogenionconcentrationofU251cells.ConclusionTheunderlyingmechanismsofSTCBontheapoptoticinductionofU251cellsmaybeassociatedentionedabove.　　Keys开口箭(Tupistrachinensi

4、sBaker)为百合科植物，其根茎具有清热利咽、活血止痛等功效［1～3］。在前期研究中发现提取其中的皂苷部位对小鼠S180肉瘤细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用［1］。现进一步探讨开口箭皂苷（SaponinfromTupistrachinensisBaker，STCB）体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制，现报道如下。　　1材料与方法　　1.1药品与试剂　　STCB由本实验室自行提取。RPMI-1640培养基，Gibco公司；新生牛血清，杭州市四季青生物工程材料有限公司；Hepes，FARCO化学品供应公司；四苯基氮唑蓝(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)，RNaseA，PI（

5、Propidiumiodide），Sigma公司；荧光探针Fluo-3-AM,SNAFL（SeminaphthofluorescEin），MolecularProbesIns；HEPES，MDBio,Inc分装；DEPC，RT-PCR反应体系，杰特伟公司；oligod(T)18，TaKaRa；琼脂糖（BioBromide，EB),上海博彩生物工程公司；引物为英骏公司合成。其余试剂均为分析纯。　　1.2动物、瘤株与培养器材SPF级豚鼠5只，由南方医科大学实验动物中心提供。人神经胶质瘤U251细胞为本所保存。PETRI培养皿，Corning公司。　　1.3体外抗肿瘤细胞增殖实验采用MTT

6、法［4］检测细胞增殖程度。在96孔板中分别加入不同浓度STCB和细胞悬液的混合液培养48h后，每孔加入2.5mg/mlMTT20μl，继续培养4h后弃去培养液，每孔加入150μlDMSO振荡10min后于酶标仪中以570nm波长检测，测定各孔的光密度值(OD)。抑制率(%)=(1-加药孔平均OD值/对照孔平均OD值)×100%。STCB对细胞的IC50值以Bliss法计算。　　1.4溶血指数测定根据　　2结果　　2.1STCB体外抗U251细胞增殖的影响　　实验结果提示STCB体外对U251细胞的增殖有抑制作用，且随浓度的增加OD570吸光度值相应下降，说明抑制作用相应提高。经计算，

7、半效抑制浓度IC50值为8.5μg/ml，其可信区间为4.63～12.66μg/ml。　　2.2STCB的溶血作用　　血细胞悬液与药物混合静置24h后，出现明显分层现象，上层透明无色，下层红色，肉眼观察下各浓度STCB给药组均未见明显溶血现象。　　2.3STCB对U251细胞DNA影响　　U251细胞经STCB处理48h后，诱导其DNA出现片断化，在琼脂糖凝胶电泳上呈现明显的“Ladder”条带。　　2.4STCB对U251细胞［Ca2+］i的影响以Flu