开口箭皂苷抗内毒素及免疫调节作用的实验研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文开口箭皂苷抗内毒素及免疫调节作用的实验研究Experimentalstudyofanti-endotoxinandimmunomodulatoryeffectsofsaponinfromTupistrachinensisBaker课题来源：广东省自然科学基金(7005189)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员药理学任婧雷林生教授陈建海教授吕俊华教授李悦山教授叶春玲教授庞建新教授论文评阅人史红陈娜娜2012年5月26日广州硕士学位论文开口箭皂苷抗内毒素及免疫调节作用的实

2、验研究硕士研究生：任婧指导教师：雷林生教授摘要目的：l、研究开口箭皂苷抗内毒素、抗炎作用。2、研究开口箭皂苷对免疫功能的影响。3、探讨开口箭皂苷对内毒素血症以及全身炎性反应综合征(SIRS)的应用前景。方法：1、采用水饱和正丁醇从开口箭植物的根茎中提取总皂苷。2、将64只昆明种小鼠随机分为4组：模型组(生理盐水)、阳性药组(地塞米松5mg／kg)、STCB高、低剂量组(400，200mg／kg)。腹腔注射铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)60mg／kg制备小鼠内毒素中毒死亡模型，STCB预防性灌胃给药，观察中毒情况、小鼠存活率

3、及存活时间。3、将40只小鼠随机分为5组，腹腔注射铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)10mg／kg，摘眼球取血，制备血清，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测内毒素血症模型小鼠血清中自介素10(IL-113)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的含量。4、取小鼠4只，Hank’S液灌洗腹腔，收集腹腔渗出细胞体外培养，采用LPS刺激小鼠腹腔渗出细胞作为体外炎症模型，用(10，20，4099／m1)STCB干预，在37"C下培养16h后ELISA法检测培养上清IL．1D和n盯-c‘的含量来观察STCB的抗炎作用。摘要5、正常小鼠40只，

4、随机分为5组：DTH模型组、阳性药物(地塞米松lOmg／kg)组、STCB高、中、低剂量(800、400、200mg／kg)组。给药组小鼠分别连续灌胃给药7d。于给药后第1日用1％二硝基氟苯(dinitro．fluorobenzene，DNFB)腹部涂抹致敏，末次给药后将1％DNFB涂抹于小鼠右侧耳廓，24h后处死动物，用打孔器取相同面积两侧耳片称重，比较给药组与模型对照组耳廓肿胀程度，并称取各组小鼠脾脏和胸腺，计算相关指数。6、正常昆明小鼠40只，随机分为5组，即模型组、阳性药物组(地塞米松10mg／kg)，STCB高

5、、中、低剂量(800，400，200mg／kg)组，每组8只。给药组小鼠分别连续灌胃干预药物7d。给药后第2天上午，各鼠腹腔注射20％(V／V)的生理盐水兔红细胞0．2ml进行免疫，同日下午继续给药，免疫后第6天，动物摘眼球取血，分离和收集血清用于血清溶血素水平测定。7、取Balb／c小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，加入不同浓度的STCB，同时加入ConA或LPS刺激，在37℃下培养48h，用MTT比色法检测ConA和LPS诱导的小鼠脾细胞的(增殖)代谢活力。8、取Balb／c小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，调节浓度后，加入4pg／

6、mlConA刺激，用(20，40，80p,g／m1)STCB干预，在37"(2下培养16h后ELISA法检测培养上清IL．2的含量。9、统计分析采用SPSS13．0统计软件，多个样本均数比较，经方差齐性检验后进行单因素方差分析(One．wayANOVA)，方差齐时，采用LSD方法进行组间两两比较；方差不齐时，用DunnettT3方法进行组间两两比较，显著性水准取a=0．05，以P

7、一起，拒食，有些动物会阴部有大片潮湿，淹淹一息，20小时后陆续有动物死亡，存活动物48小时后逐渐恢复正常。内毒素休克模型实验中，经STCB(200，400mg／kg，连续5d)预处理的动物存活率II硕士学位论文高于模型组，其存活率依次为31．3％，37．5％和18．8％，但没有统计学意义(庐1．424，P=-0．494)。不过内毒素休克模型实验中给STCB(200，400mg／kg)药组小鼠的存活时间明显长于模型组(卢0．051，P=0．028)。2、正常小鼠血清促炎细胞因子IL．1D和TNF-Q的含量很低，腹腔注射LP

8、S后3小时，小鼠血清中的IL．1p和TNF．o【的含量明显升高(尸<0．001，P<0．001)，分别达到基础水平的47倍和67倍。经开口箭皂苷(200，400mg／kg)预处理的动物血清IL．1p和TNF．0【的含量升高的幅度均低于LPS模型组，IL．1D的含量分别下降24％和42％(P-=o．247，P=0．00