开口箭总皂苷的含量测定

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1、开口箭总皂苷的含量测定【摘要】目的建立开口箭中总皂苷含量测定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液为发色体系，检测波长为（458±2）nm。结果标准曲线在0.10～0.40mg范围内(r=09997)线性关系良好。平均回收率97.2%，方法的变异系数为4.57%，测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为13.51%。结论方法简便，准确，重现性好，可用于开口箭总皂苷含量测定。【关键词】开口箭总皂苷开口箭比色法　　Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinen

2、sisBak.MethodsThesamplesinedbyspectrophotometry.Thedetective.ResultsThecalibrationcurvegandtheaveragerecoveryethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak.　　Keyetry;Spectrophotometry开口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）铃兰族开口箭属植物。其原植物又名开喉箭、万年青，为多

3、年生常绿草本，以其根状茎入药，作为药用又名岩七、竹根七、竹节参、竹根七、竹节七、牛尾七等。医学古籍记载，开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症。土家族民间用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎，疗效显著［1］。我国开口箭属植物约占全世界的70%,分布于陕西、甘肃、湖北、四川、云南、贵州等省。主产于湖北三峡库区及神龙架林区，栽培面积大，产量高，资源十分丰富。本实验室对神农架产开口箭TupistrachinensisBak.的生药学、化学成分和药理活性进行了研究，结果表明开口箭正丁醇提取物对Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，细胞毒活性好，抗炎活性也很

4、好。也曾报道了“开口箭中甾体皂苷元的含量测定”［2］。本文进一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法测定开口箭中总皂苷含量的方法。　　1材料与仪器　　1.1材料　　开口箭根茎，采自湖北省神农架林区，其原植物标本于200207采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，原植物及药材现保存于本实验室（编号TC200207SNJ）。总皂苷对照品，本实验室自开口箭分离纯化的皂苷单体3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羟

5、基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC测定）。其他试剂均为分析纯。　　1.2仪器S3100紫外分光光度计（韩国Scinco公司），BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）。　　2方法　　2.1对照品、供试品溶液的制备　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取经干燥至恒重的开口箭总皂苷对照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。　　2.1.2供试品溶液的制备精密称取开口箭粉末0.70g（60目筛，50℃干燥4h）置圆底烧瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡过夜，60℃回流提取两次，2h/次,减压抽滤，滤液合并，置

6、蒸馏烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压浓缩，除尽溶剂后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，过滤，取续滤液作为供试品溶液。　　2.2测定方法适量供试品溶液置干燥具塞试管，60℃水浴挥干溶剂后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，摇匀，置60℃恒温水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却15min，加入5ml冰醋酸，摇匀，同时做空白，于（458±2）nm波长处测定吸光度值。　　2.3标准曲线的绘制与线性关系精密吸取对照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分别加入干燥具塞试管中，60℃水浴挥干溶剂,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋

7、酸溶液和0.8ml高氯酸，置60℃水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反应，加入5ml冰醋酸，摇匀，于458nm处测定吸光度，同时做试剂空白。以吸光度为纵坐标，以对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程g范围内线性关系良好。　　3结果　　3.1精密度及重现性实验精密吸取对照品溶液0.2ml,共6份，按“2.2”项下方法自60℃水浴挥干起测定（见表1）。其RSD为1.09%，表明方法精密度良好。精密称取样品