hif-1α介导ggt对脑胶质瘤细胞迁移和侵袭作用的研究

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1、徐州院硕士学位论文HIF．1a介导GGT对脑胶质瘤细胞迁移和侵袭作用的研究中文摘要目的研究Geranylgeranyltransferase(GGT)对脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的影响，并探讨其作用机制，为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据。方法1．分别应用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭能力。2．明胶酶谱实验检测脑胶质瘤U251细胞中MMP．2活性表达。3．WesternBlot检测低氧条件培养0，6h，12h，24h，48h后脑胶质瘤U251细胞中HIF-la蛋白表达。4．设计并合成针对人HIF—la基因和GGT

2、l3基因的siRNAoligo，通过WB检测干扰效果，并检测GGTIg同源家族FTa和FTB蛋白表达来验证GGTl3siRNA的特异性。5．采用GGT-298抑制GGTl3活性或用siRNA下调GGTl3表达后，WB检测HIF．1a蛋白表达情况；并用siRNA下调HIF．1a表达后，检测GGTl3蛋白表达情况。结果1．低氧培养6h，12h，24h，48h后人脑胶质瘤U251细胞中HIF—la蛋白表达较常氧条件下增多，提示低氧模型构建成功。2．与常氧条件相比，低氧促进脑胶质瘤U251细胞的迁移和侵袭，且上调MMP．2的活性。3．与阴性对照相比，用siRNA下调HI

3、F．1a和GGTIg的表达均可抑制人脑胶质瘤U251细胞迁移、侵袭和MMP．2的活性。4．应用siRNA下调GGTp后，FTa和FTIg蛋白表达均无变化，提示构建的GGTIgsiRNA具有特异性。5．应用GGT-298抑制GGT活性或用siRNA下调GGT[3表达后，HIF．10t蛋白水平降低；而下调HIF．1a对GGTl3蛋白水平无影响。6．与对照组相比，过表达GGT[3可增加U251细胞迁移和侵袭能力，而下调HIF．1a的表达则可逆转GGTl3的此种作用。结论脑胶质瘤细胞中GGT可能通过HIF．1a调节细胞的迁移和侵袭。关键词脑胶质瘤；低氧；迁移；侵袭；HI

4、F．1a；GGT徐州院硕士学位论文GGTregulatesHIF--la--mediatedglioblastomacellmigrationandinvasionAbstractObjectiveTostudytheimpactofGeranylgeranyltransferase(GGT)ongliomaU251cellsmigrationandinvasion，andexploretheinvolvedmechanism，whichmayprovideatheoreticalandexperimentalbaseofgenetherapyinglioma．

5、Methods1．ToanalyzegliomaU251cellsmigrationandinvasionbywoundingassayandinvasionassay,respectively．2．TheGelatinZymographywasusedtodetecttheactivityofMMP-2．3．TheproteinexpressionofHIF—lainbraingliomaU251cells0，6h，12h，24，48hafterhypoxiawasstudiedbyWesternBlot(WB)．4．Toexaminetheefficienc

6、yofdesignedandsynthesizedGGTl3siRNAandHIF-lasiRNAbyWB，andstudythespecificityofOGTl3siRNAoligobyanalyzingtheproteinexpressionofFTaandFTl3，thehomologousfamilyofGGT．5．TodetecttheproteinexpressionofHIF—laaftersuppressionofGGTactivitybyinhibitorGGT-298ordownregulationtheexpressionofbysiRN

7、Aoligo；andanalyzetheproteinexpressionofGGTl3afterHIF—ladepletionbyWB．Results1．TheproteinexpressionofHIF—lawashigher6h，12h，24，48hafterhypoxiacompared、析tllnormoxiaingliomaU251cells．suggestingthemodelofhypoxiaenvironmentissuccessful．2．Comparedwithnormoxia，HypoxiaincreasedgliomaU251cells

8、migration，in